4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
QUY TRÌNH SẢN SUẤT CHẾ PHẨM AN
phê)
Nuôi lỏng trong bình tam giác có 200ml môi trường PDA lỏng ở 30oC, pH: 6,0 lắc 200 v/p
sau 48h thu hồi sinh khối
Nuôi cấy bề mặt trên môi trường cám trấu tỷ lệ
4:1, tỷ lệ tiếp giống 10%; ñộẩm môi trường 65% với ñộ dày: 6cm/khay ở 30 0C; pH 6,0;
nuôi bề mặt 7 ngày
Thu hồi, ñóng gói
10kg chế phẩm/ túi polyetyen và bao bì PP Thu hồi bào tử AN2
Phun ẩm 10% khối lượng sinh khối; ñộẩm sinh khối nấm sau khi thu hồi ñạt 17%
Chế phẩm AN bảo quản mát Chủng A. niger AN2 không sinh ñộc tố Phối trộn than bùn tỷ lệ 1:1
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 54
Thuyết minh qui trình
Bước 1: Nuôi lỏng thu hồi sinh khối
25 ống giống chủng A. niger AN2 không sinh ochratoxin A giữ giống trong ống thạch nghiêng ñược cấy truyền sang 25 bình tam giác 500ml có chứa 200ml môi trường PDA lỏng tiến hành nuôi lỏng thu hồi sinh khối.
Sau khi cấy truyền sang bình tam giác giống ñược nuôi cấy ở máy lắc vận tốc 200v/phút, nhiệt ñộ 300C, pH 6,0 trong 48 giờ. Sau khi nuôi lỏng thu
ñược 5lít sinh khối chủng A. niger AN2 trong môi trường PDA lỏng.
Bước 2: Nuôi cấy bề mặt
Chuẩn bị môi trường cám trấu: cám trấu ñược trộn ñều theo tỷ lệ 4:1. Xác ñịnh ñộẩm của nguyên liệu cám trấu ban ñầu bằng cách xác ñịnh ñộ ẩm theo phương pháp trọng lượng không ñổi. Khi biết ñộẩm của cám trấu thì bổ
sung 1 lượng nước ñểñạt ñược ñộẩm 65% là ñộẩm tối ưu ñể nuôi cấy chủng
A. niger AN2 không sinh ochratoxin A . Cho nguyên liệu cám trấu vào túi
nilong , mỗi túi 2kg cám trấu, hấp khử trùng ở nhiệt ñộ 1200C trong 1 giờ. ðể
nguyên liệu cám trấu nguội ñến 300C rồi ñổ vào các khay có kích thước 80cmx50cmx15cm, ñộ dày cám trấu 6cm/khay, mỗi khay có 5kg môi trường
ñể nguội.
Tiếp giống với tỷ lệ 10% vào môi trường cám trấu ñã chuẩn bị, trộn thật ñều hỗn dịch chủng giống A. niger AN2không sinh ochratoxin A và cám trấu. ðể tránh nhiễm khuẩn ở các khay khi nuôi chủng A. niger AN2, ñậy khay nuôi cấy bằng một khay có cùng kích thước.
Nuôi bề mặt chủng A. niger AN2 với môi trường cám trấu trên các khay ở nhiệt ñộ 300C, ñộẩm 65%, trong 7 ngày. Các khay nuôi cấy ñược ñặt trên các dàn sắt có kích thước cao 1,5m x dài 1,2m x rộng 0,6m.
Bước 3: Thu hồi bào tử chủng A. niger AN2
Sau khi kết thúc nuôi cấy, phun 1 lượng nước bằng 10% khối lượng sinh khối lên bề mặt, trộn ñều rồi ñể nước thấm ñều vào toàn bộ khay có sinh khối
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 55
chủng A. niger và ñể trong 1 giờ. Mục ñích của việc làm này là ñể tránh các bào
tử bay ra ngoài môi trường. ðộẩm sinh khối nấm sau khi thu hồi ñạt 17% (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bước 4: Phối trộn than bùn và ñóng gói chế phẩm AN
Xử lý than bùn: Phối trộn 10% vôi bột với than bùn ñểñạt pH 6,0, sau
ñó phơi nắng hoặc sấy ở 500C ñến khi ñạt ñộẩm 8% và nghiền nhỏ.
Phối trộn lượng sinh khối ở khay với than bùn ñã xử lý tỉ lệ sinh khối
chủng A. niger AN1 không sinh ochratoxin A và than bùn là 1:1, tương ñương
5kg bào tử + 5kg than bùn trên 1 khay. Sau khi trộn ñều tiến hành ñóng gói chế phẩm AN vào túi polyetylen, mỗi túi có trọng lượng 10kg và ñóng bao bì PP. ðộẩm chế phẩm ñạt 12 – 12,5%.
Bước 5: Bảo quản chế phẩm AN
Bảo quản chế phẩm nơi khô mát, tốt nhất là 100C