4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3.2. Nghiên cứu công nghệ nuôi cấy bề mặt sản xuất bào tử chủng A niger AN2 quy mô phòng thí nghiệm
niger AN2 quy mô phòng thí nghiệm
Aspergillus niger AN2 là dạng nấm sợi hiếu khí nên phát triển tốt trên
môi trường xốp và nuôi cấy bề mặt, cho lượng bào tử lớn và phương pháp này dễ thực hiện, ít tốn kém do ñó chúng tôi lựa chọn phương pháp nuôi cấy bề
mặt ñể nhân nuôi bào tử chủng Aspergillus niger AN2.
4.3.2.1. Lựa chọn môi trường thích hợp
Chủng A. niger AN2 ñược nuôi cấy bề mặt ởñiều kiện nhiệt ñộ 300C,
pH 6,0 hàm ẩm 65%, tỷ lệ tiếp giống 10% trên 4 môi trường khác nhau trong các bình tam giác gồm: môi trường cám trấu (MT1), gạo (MT2), bột ngô(MT3) và ngô hạt (MT4) ñây là các môi trường rất sẵn có và rẻ tiền. Sau 7 ngày nuôi cấy thu hồi bào tử, sấy khô ở nhiệt ñộ 450C sau 24h xác ñịnh mật
ñộ bào tử, kết quảñược trình bày ở bảng 4.3
Thời gian (h) L ư ợ ng s in h kh ố i ( g/ l)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 47
Bảng 4.3: Mật ñộ bào tử của chủng A. niger AN2 tạo ñược trên các môi trường khác nhau
STT Môi trường nuôi cấy Mật ñộ bào tử (CFU/g)
1 MT1 2,1 x 109 ± 0,1
2 MT2 2,2 x 108±0,1
3 MT3 8,7 x 107±0,002 4 MT4 6,7 x 108±0,02
Chú thích:
MT1: 80% cám, 20% trấu, ñiều chỉnh ñộẩm 65% bằng môi trường PDA lỏng
MT2: 100% cám, ñiều chỉnh ñộẩm 65% bằng môi trường PDA lỏng
MT3:75% bột ngô, 25% trấu, ñiều chỉnh ñộẩm 65% bằng môi trường PDA lỏng
MA4: 100% ngô hạt, ñiều chỉnh ñộẩm 65% bằng môi trường PDA lỏng
Kết quả bảng 4.4 cho thấy, bào tử chủng A. niger AN2 ñược nuôi bề
mặt trên các môi trường khác nhau lượng bào tử thu ñược khác nhau khá rõ
rệt. A. niger AN2 nuôi cấy trên môi trường cám trấu (tỉ lệ 4:1) lượng bào tử
thu ñược là 2,1 x 109 CFU/g, trong khi ñó trên môi trường bột ngô MT3 lượng bào tử thu ñược chỉñạt 6,7 x 107 CFU/g. Chúng tôi lựa chọn môi trường thích hợp cho sự phát triển và sự tạo bào tử củachủng A. niger AN2 là môi trường cám trấu (tỉ lệ thành phần môi trường 4:1).
4.3.2.2. Ảnh hưởng của nhiệt ñộ nuôi cấy
Trong nghiên cứu này chủng A. niger AN2 ñược nuôi cấy trên môi trường cám trấu tỷ lệ 4:1, pH =6,0, ñộẩm 65%, lượng giống ban ñầu 10% với các khoảng nhiệt ñộ trong khối ủ thay ñổi lần lượt là: 24, 26, 28, 30, 32 và 340C. Khả năng tạo bào tử của chủng A. niger AN2 ở các ñiều kiện nhiệt ñộ
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 48
Bảng 4.4: Khả năng tạo bào tử của chủng A. niger AN2 ở các nhiệt ñộ nuôi cấy khác nhau
STT Nhiệt ñộ (0C) Mật ñộ bào tử (CFU/g)
1 24 7,8 x 107 2 26 5,5 x 108 3 28 1,6x 109 4 30 2,1 x 109 5 32 8,7 x 108 6 34 7,5 x 107 Kết quảở bảng 4.5 và ñồ thị 4.3 cho thấy, ở các ñiều kiện nhiệt ñộ khác nhau mật ñộ bào tử chủng A. niger AN2 khác nhau rõ rệt. Ở 240C mật ñộ bào tử của chủng ñạt 7,8 x 107 CFU/g, ở 300C chủng có khả năng tạo bào tử cao nhất là 2,1 x 109 CFU/g sau 7 ngày nuôi cấy. Ở nhiệt ñộ cao hơn 320C mật ñộ
bào tử chủng bắt ñầu giảm còn 8,7 x 108 CFU/g và khi nhiệt ñộ tăng lên 340C mật ñộ bào tử chỉ còn 7,5 x 107 CFU/g. Kết quả này phù hợp với ñiều kiện nhiệt ñộ tối ưu phát triển nấm mốc Aspergillus niger, do ñó nhiệt ñộ thích hợp
ñể nuôi cấy chủng A. niger AN2 cho sự tạo bào tử cao nhất là 300C.
4.3.2.3. Ảnh hưởng của ñộẩm của môi trường
ðể nghiên cứu ảnh hưởng của ñộẩm môi trường nuôi cấy ñến khả năng tạo bào tử, chủng A. niger AN2 ñược nuôi cấy ở 300C, pH 6,0 trên môi trường cám trấu tỉ lệ 4:1, với ñộ ẩm ban ñầu khác nhau thay ñổi trong khoảng từ
55%-75%. Kết quảñược trình bày ở bảng 4.5.
Bảng 4.5: Ảnh hưởng của ñộ ẩm môi trường ñến khả năng tạo bào tử của chủng A. niger AN2
STT ðộ ẩm (%) Mật ñộ bào tử (CFU/g) 1 55 2,4 x 108 2 60 8,6 x 108 3 65 2,1 x 109 4 70 7,4 x 108 5 75 2,0 x 107
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 49
Kết quả ở bảng 4.5 cho thấy, khi tăng ñộ ẩm môi trường từ 55% ñến 65%, khả năng tạo bào tử của chủng A. niger AN2 tăng dần và ñạt giá trị cực
ñại là 2,1 x 109 CFU/g. Khi ñộẩm môi trường tăng ñến 70 – 75% thì mật ñộ
bào tử giảm nhanh chóng chỉ còn 2,0 x 107 CFU/g. Kết quả này chứng tỏñộ ẩm môi trường tối ưu cho chủng A. niger AN2 phát triển ñạt hàm lượng bào tử cực ñại ở 65% .
4.3.2.4. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy
ðể tiến hành xác ñịnh ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy ñến khả năng tạo bào tử của chủng A. niger AN chúng tôi tiến hành nuôi cấy chủng A. niger
AN2 trên môi trường cám trấu với ñiều kiện nhiệt ñộ 300C, ñộẩm môi trường 65%, pH 6,0 và xác ñịnh mật ñộ bào tử sau các khoảng thời gian nuôi cấy khác nhau. Kết quảñược trình bày ở bảng 4.6.
Bảng 4.6 Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy ñến khả năng tạo bào tử của chủng A. niger AN2
STT Thời gian nuôi
cấy (ngày) Mật ñộ bào tử (CFU/g)
1 1-3 Chỉ có sợi nấm phát triển, không có bào tử nhìn thấy bằng mắt thường 2 4 1,4 x 105 3 5 2,5 x 106 4 6 7,2 x 108 5 7 2,1 x 109 6 8 2,1 x 109 7 9 2,2 x 109 8 10 2,3 x 109
Kết quả ở bảng 4.6 cho thấy, mật ñộ bào tử chủng A. niger AN2 nuôi cấy trên môi trường cám trấu tăng nhanh trong khoảng thời gian từ 4-7 ngày. Ngày thứ 7 mật ñộ bào tử ñạt 2,1x109CFU/g và ñạt cao nhất ở ngày thứ 10 là 2,3x109 CFU/g. Như vậy, có thể nói thời gian nuôi cấy phù hợp cho sự tạo
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 50
bào tử chủng A. niger AN2 là 7 ngày vì nếu kéo dài thời gian nuôi cấy ñến ngày thứ 10 thì sẽ làm tăng chi phí trong sản xuất, trong khi sản lượng bào tử
A. niger AN2 tăng lên không nhiều.
Từ kết quả nghiên cứu trên có thểñưa ra ñiều kiện công nghệ nhân nuôi
chủng A. niger AN2 như sau: chủng nấm mốc A. niger AN2 ñược tăng sinh
trên môi trường PDA lỏng ở nhiệt ñộ 300C, lắc 200 v/p, sau 48 giờ thu hồi sinh khối hệ sợi phân phối lên môi trường bề mặt với tỷ lệ giống 10%. Chủng
A. niger AN2 cho khả năng tạo bào tử cao trên môi trường cám trấu (tỷ lệ
4:1) ở nhiệt ñộ nuôi cấy 300C, pH 6,0, ñộ ẩm 65%, sau 7 ngày nuôi cấy mật
ñộ bào tửñạt 2,1x109CFU/g.