Bột Phụ tử (2.8 kg) đã xay thô, sấy khô ở nhiệt độ 60 0
C, ngâm chiết bằng ethanol (6 l x 3 lần x 24h/lần). Dịch chiết tổng được loại cặn bằng cách lọc qua giấy lọc, sau đó đem cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được cao ethanol (300.8 g). Cao ethanol được phân tán vào ít nước, kiềm hóa bằng amoniac đặc đến pH 9.0, lắc với n-hexan (3 lần x 750 ml/lần), gộp dịch chiết phân đoạn n-hexan và cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm, thu được cao n-hexan (130.6 g). Cao n-hexan được phân tách bằng phương pháp sắc ký trên cột silica gel pha thường cỡ hạt 0.063-0.200 mm,
52
với hệ dung môi rửa giải là n-hexan - EtOAc có độ phân cực tăng dần (100:0, 80:20, 50:50, 35:65, 25:75, 15:85) thu được 6 phân đoạn lớn có kí hiệu từ A đến F.
- Phân đoạn A (3.2 g) tiến hành triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040-0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan - aceton (90:10) thu được chất OD1 (29 mg) tinh thể màu trắng, Rf = 0.33 (n-hexan - aceton, 85:15).
- Phân đoạn B (2.1 g) triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan - EtOAc (85:15) thu được chất OD2 (21 mg), OD3 (19 mg). Trong đó OD2 là tinh thể trắng đục, Rf = 0.30 (n-hexan - EtOAc, 85:15), OD3 là tinh thể màu trắng ngà, Rf = 0,40 (n-hexan - EtOAc, 85:15).
- Phân đoạn C (1.6 g), triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi EtOAc - MeOH (85:15) thu được chất OD5 (16 mg), chất này hiện màu với thuốc thử Dragendorff, Rf = 0.4 (CH2Cl2 - MeOH = 85:15).
- Phân đoạn D (3.8 g), triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi EtOAc - MeOH (80:20) thu được chất OP7 (17 mg), chất này hiện màu với thuốc thử Dragendorff, Rf = 0.20 (CH2Cl2 - MeOH = 95:5). Cũng từ phân đoạn D triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040-0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi CH2Cl2 - MeOH (90:10) thu được chất OD8 (16 mg), Rf = 0.52 (CH2Cl2 - MeOH = 95:5).
- Phân đoạn E (4.2 g) triển khai sắc ký cột trên cột silica gel pha thường, cỡ hạt 0.040- 0.063mm, rửa giải bằng hệ dung môi CH2Cl2 - MeOH (90:10) thu được chất OD9 (16 mg), Rf = 0.45 (CH2Cl2 - MeOH = 95:5).
- Phân đoạn F (1.1 g) triển khai sắc ký trên cột silica gel pha thường cỡ hạt 0.040- 0.063 mm, rửa giải bằng hệ dung môi CHCl3 - MeOH (90:10) thu được chất OD10 (15 mg), Rf = 0.35 (CHCl3 - MeOH = 95:5).
53
Hình 3.14. Sơ đồ chiết xuất và phân lập các hợp chất từ Phụ tử