+ Môi trường PDA ựể phân lập nấm: khoai tây 200g, ựường destrose 20g và nước cất 1000ml.
+ Môi trường King B (KB) ựể phân lập và thu sinh khối vi khuẩn ựối kháng: Yeast extract 5g; pepton 20g; glyxerin 5ml; K2HPO4 (12,5%) 12ml; MgS04.7H20 (6,25%) 25ml; nước cất 1000ml; pH = 7,0.
+ Môi trường PSA: saccharoza 20g; Pepton 5,0g; K2HPO4 0,5g; MgSO4.7H2O 0,25g; Nước cất 1000ml; pH = 6,8 Ờ 7,1
+ Môi trường NA: nutrient agar 23g, nước cất 1000ml
+ Môi trường Chitine agar ựể phân lập xạ khuẩn: 2g chintine, nước cất 1000ml
- Các hóa chất trong phản ứng PCR.
1. Thu thâp và phân lập nguồn nấm Phytophthora palmivora và VSV ựối
kháng nấm Phytophthora palmivora tại các vùng trồng sầu riêng (Bà
rịa Vũng Tàu, Vĩnh Long, đồng Nai).
2. Nghiên cứu ựánh giá khả năng ựối kháng của các VSV thu thập ựược ựối với nấm Phytophthora palmivora trong phòng thắ nghiệm và nhà
lưới.
3. Nghiên cứu ựặc ựiểm sinh học, sinh thái, yếu tố ảnh hưởng ựến sinh trưởng phát triển và phản ứng sinh lý, sinh hóa của các nguồn VSV ựối kháng.
4. Chuẩn ựoán và giám ựịnh các VSV ựối kháng bằng phương pháp sinh học phân tử.
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Thu thâp và phân lập nguồn nấm Phytophthora palmivora và VSV
ựối kháng nấm Phytophthora palmivora
2.3.1.1. điều tra tình hình bệnh hại sầu riêng
Theo phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật của Viện Bảo vệ thực vật (quyển I, II, III xuất bản năm 1997, 1999, 2000). điều tra tỉ lệ bệnh
Phytophthora palmivora trên mỗi cây trồng tại 5 vườn, mỗi vườn chọn ngẫu
nhiên 20 cây theo hai ựường chéo góc.
Tỷ lệ cây nhiễm bệnh (%) = Tổng số cây ựiều tra x 100 Số cây bị bệnh
2.3.1.2. Phân lập nấm Phytophthora palmivora và VSV ựối kháng
Mẫu ựất, cây ựược thu từ ựất trồng sầu riêng có biểu hiện triệu chứng nhiễm bệnh ựiển hình ở một số tỉnh như: Bà Rịa Ờ Vũng Tàu, Vĩnh Long, đồng Nai ựể phân lập nấm Phytophthora palmivora và vi sinh vật ựối kháng. a. Phương pháp phân lập nấm Phytophthora palmivora: theo phương pháp
Phương pháp phân lập Phytophthora palmivora từ ựất và rễ cây bằng sử
dụng mồi bẫy cánh hoa hồng.
- Lấy mẫu ựất ở gốc của cây bị bệnh
- Cho ựất vào 1/3 cốc, thêm nước cất vô trùng vào tới khi ựạt 3/4 cốc. Khuấy nhẹ ựất trong cốc bằng ựũa thuỷ tinh, ựể ựất lắng xuống trong 2 giờ (tốt nhất ựể qua ựêm).
- Cắt cánh hoa có màu sắc 0,5 x 0,5 cm (1 mồi bẫy) thả vào cốc nước trên.
- để cốc bẫy bào tử qua ựêm ở nhiệt ựộ 20-250C.
- Quan sát cánh hoa sau: 1 ngày, 2 ngày, 3 ngày. Khi thấy cánh hoa bị mất màu ựem lên kinh hiển vi soi, quan sát thấy bào tử nấm
Phytophthora palmivora.
- Làm thuần cánh hoa ựem cấy lên môi trường: CA, PCA... b. Phân lập VSV ựối kháng nấm Phytophthora palmivora