- Các môi trường sử dụng trong phản ứng sinh lý, sinh hóa vi sinh vật
3.3. Khả năng ựối kháng của vi sinh vật ựối với nấm Phytophthora palmivora gây hại trên sầu riêng
palmivora gây hại trên sầu riêng
để có ựược tác nhân sinh học, sản xuất chế phẩm sinh học phòng trừ bệnh phytophthora palmivora trên các cây sầu riêng, ựề tài ựã tiến hành thu
thập các dịng VSV có khả năng ựối kháng nấm Phytophthora palmivora. Các dòng VSV này ựược thu thập tại các vùng trồng cây bị bệnh nhưng tại những ựiểm thu thập cây không bị bệnh. Sau khi phân lập, tách dòng thuần, các VSV này ựược thử nghiệm khả năng kháng nấm Phytophthora palmivora trong
ựiều kiện phịng thắ nghiệm nhằm tìm ra những VSV có hiệu quả cao nhất, hạn chế sự sinh trưởng của nấm Phytophthora palmivora. 61 dòng vi sinh vật ựã ựược phân lập từ 30 mẫu ựất thu thập từ các vùng cây bị bệnh do nấm
Phytophthora palmivora gây ra. Sau khi ựược phân lập, tách dòng thuần, tất
cả các dòng vi sinh vật trên ựược thử nghiệm khả năng ựối kháng theo phương pháp cấy ựối xứng (Yoshida và cộng sự, 2001) với nấm Phytophthora
palmivora gây bệnh trên sầu riêng. Mặc dù số lượng dòng VSV phân lập
ựược nhiều nhưng trong số ựó chỉ có 8 dịng có triển vọng (1 dòng nấm, 2 dòng vi khuẩn và 5 dòng xạ khuẩn. Các dòng nấm, vi khuẩn hay xạ khuẩn ban ựầu ựược xác ựịnh qua hình thái khuẩn lạc và môi trường dinh dưỡng chọn lọc ựể phân lập và nhân nuôi) với khả năng ựối kháng cao (+++) với các nấm nói trên (bảng 3.4).
Năm 2007, Ezziyyanil M. và cộng sự khi nghiên cứu, cho rằng hỗn hợp
Trichoderma harzianum và Streptomyces rochei có thể hạn chế tới 75% sự
gây hại của nấm P. capcisi và hỗn hợp này có hiệu lực tới 2 năm khi trộn hỗn hợp vi sinh vật với ựất và chất khoáng, bảo quản trong ựiều kiện nhiệt ựộ phòng. Theo kết quả nghiên cứu của tác giả Tangonan N. G. (2006), sử dụng nấm ựối kháng Trichoderma harzianum trong phịng trừ, có hiệu quả ựối bệnh do nấm Phytophthora palmivora gây loét sọc miệng cạo và rụng lá mùa mưa, là tác nhân chắnh gây mất mủ cao su ở Philippine.
Bảng 3.4. Phân lập vi sinh vật có ắch từ ựất trồng cây bị bệnh nấm
Phytophthora palmivora (Viện BVTV Ờ 2012)
Khả năng ựối kháng Cây trồng địa ựiểm Số mẫu
Số dòng VSV phân lập ựược +++ ++ + đồng Nai 10 16 1 4 11 Vũng Tàu 10 18 1 3 14 Sầu riêng Vĩnh Long 10 27 0 3 24 Tổng số 30 61 2 10 49 Tỉ lệ (%) 3,28 16,39 80,33 Ghi chú: +++: ựường kắnh ức chế > 10mm ++: ựường kắnh ức chế từ 6-10mm +: ựường kắnh ức chế từ 1-5mm Hình 3.1. Phân lập vi sinh vật có ắch từ ựất
3.3.2. Xác ựịnh khả năng ức chế nấm bệnh của các VSV có ắch
Sau khi có kết quả ban ựầu về khả năng ựối kháng của các dòng VSV có triển vọng hạn chế nấm Phytophthora palmivora, 8 dịng VSV có khả
năng ựối kháng cao nhất ựược thử nghiệm lại nhằm mục ựắch chọn lọc ra những dịng VSV nào có khả năng ựối kháng nấm gây bệnh sầu riêng, tạo cơ sở ựể phát triển thành tác nhân sinh học.
Các VSV ựối kháng tham gia thắ nghiệm ựều có khả năng hạn chế sự sinh trưởng của nấm Phytophthora palmivora với hiệu quả ức chế biến thiên từ 82,2 ựến 86,8% (bảng 3.5).
Bảng 3.5. Khả năng ựối kháng của 7 nguồn vi sinh vật có triển vọng với nấm
Phytophthora palmivora gây bệnh trên sầu riêng (Viện BVTV Ờ 2012)
đường kắnh tản nấm Phytophthora
palmivora sau 7 ngày (mm)
Kắ hiệu nguồn VSV VK, XK Công thức đối chứng HQUC (%) P9 - 1 VK 13,5a ổ0,8 78,0 82,6 BH3 Ờ 2 VK 13,8a ổ0,7 78,0 82,2 P1- 52 XK 13,3a ổ0,4 78,0 82,8 P12 Ờ 12 XK 10,2b ổ0,6 78,0 86,8 BH3 Ờ 3 XK 13,0a ổ0,7 78,0 83,2 BH1- 6 XK 12,8a ổ0,6 78,0 83,5 X7 - 21 XK 13,5a ổ0,9 78,0 82,9 CV% 6,8 Ghi chú:
Các giá trị trong cùng một cột biểu thị bằng các chữ giống nhau sai khác khơng có ý nghĩa ở xác suất P > 0,05 theo phân tắch DuncanỖs.
Tuy nhiên các dòng VSV khác nhau thì khả năng hạn chế nấm
Phytophthora palmivora cũng khác nhau. Dòng P12-12 có hiệu quả cao nhất hạn chế nấm Phytophthora palmivora với hiệu quả ức chế là 86,8%. Các dòng VSV ựối kháng khác ựều có hiệu quả hạn chế nấm trên 82%. Tất cả các dòng VSV tham gia thắ nghiệm tiếp tục ựược sử dụng trong các thắ nghiệm tiếp theo nhằm tìm ra những dịng có hiệu quả nhất, phù hợp với ựiều kiện môi trường ựể sử dụng làm tác nhân sinh học sản xuất chế phẩm sinh học phòng trừ nấm Phytophthora palmivora.
Bảng 3.6. Hiệu quả ức chế bằng ký sinh trực tiếp của 7 nguồn vi khuẩn và xạ khuẩn với nấm Phytophthora palmivora gây bệnh trên sầu riêng
(Viện BVTV - 2012)
Ghi chú:
Các giá trị trong cùng một cột biểu thị bằng các chữ giống nhau sai khác khơng có ý nghĩa ở xác suất P > 0,05 theo phân tắch DuncanỖs.
TT Kắ hiệu
nguồn VSV VK & XK
đường kắnh vòng ức chế của các dòng VSV ựối với nấm Phytophthora
(mm) 1 P 9 - 1 VK 24,5b ổ 0,8 2 BH 3 Ờ 2 VK 16,5d ổ 0,9 3 P 1- 52 XK 27,8a ổ 0,5 4 P 12 Ờ 12 XK 28,3a ổ 0,7 5 BH 3 Ờ 3 XK 21,2c ổ 0,7 6 BH 1- 6 XK 16,0d ổ 0,7 7 X 7 - 21 XK 16,3d ổ 0,9 CV% 8,1
Hoạt tắnh kháng sinh của 7 dòng vi khuẩn và xạ khuẩn cũng ựược xác ựịnh qua kắch thước vịng vơ khuẩn. Kết quả ựược trình bày tại bảng 3.6, số liệu thắ nghiệm cho thấy 7 dòng vi sinh vật ựều có khả năng ức chế nấm
Phytophthora palmivora cao thể hiện qua ựường kắnh vịng vơ khuẩn ựo ựược
và khả năng ức chế cũng cho kết quả tương tự như phương pháp cấy ựối xứng. Trong số các dịng VSV nói trên thì hai dịng xạ khuẩn P1-52, P12-12 và dòng vi khuẩn P9-1 có khả năng cao nhất với ựường kắnh vịng vơ khuẩn biến thiên từ 24,5 ựến 28,3 mm. Dịng xạ khuẩn X7-21 có khả năng thấp nhất hạn chế sự sinh trưởng và phát triển nấm Phytophthora palmivora.
Hình 3.2. Khả năng ựối kháng nấm Phytophthora palmivora bằng chất kháng sinh của vi khuẩn & xạ khuẩn
Bên cạnh 7 dịng vi khuẩn và xạ khuẩn thì hai dịng nấm Trichoderma bao gồm một dòng ựược phân lập và thu thập tại đồng Nai, một loài
Trichoderma harzianum nhập nội ựang ựược sử dụng ựể sản xuất chế phẩm
sinh học phòng trừ nấm bệnh trong ựất và ựược lưu giữ tại phòng thắ nghiệm Bộ môn Bệnh cây, ựã ựược thử nghiệm ựể tìm hiểu khả năng hạn chế nấm
Phytophthora palmivora gây bệnh trên sầu riêng. Kết quả thắ nghiệm trình bày ở bảng 3.7, kết quả cho thấy sau 2 ngày cấy truyền cả nấm Trichoderma
và Phytophthora ựều phát triển và lan nhanh trên môi trường, giữa vùng nấm bệnh và nấm Trichoderma hình thành một ựường gianh giới gọi là viền ựối kháng. Từ ngày thứ 4, nấm Trichoderma ựã tiếp cận và ký sinh sợi nấm Phytophthora làm cho tản nấm Phytophthora không phát triển và khơ hồn
tồn. Ở công thức thắ nghiệm, do bị ký sinh nên ựường kắnh tản nấm
Phytophthora ghi nhận ựược chỉ từ 0 ựến 5mm. Ở công thức ựối chứng
(không cấy nấm Trichoderma), nấm Phytophthora sinh trưởng và phát triển
bình thường, sau 7 ngày ựạt ựường kắnh 84,3mm. Hiệu quả ức chế của cả hai dòng nấm Trichoderma sp. và T. harzianum ựối với nấm Phytophthora palmivora gây bệnh trên cây sầu riêng dao ựộng từ 94,3% - 100 %.
Bảng 3.7. Khả năng ức chế của nấm Trichoderma với nấm Phytophthora
palmivora trên môi trường nuôi cấy (Viện BVTV - 2012)
đường kắnh vùng nấm (mm) Công thức Trichoderma sp. Phytophthora palmivora HQƯC (%) đối chứng (T. harzianum) 88,0 - - T. harzianum+ Phytophthora palmivora 88 0,0 100 đối chứng (Trichoderma sp.) 88,0 - - Trichoderma sp. + Phytophthora palmivora 83 5,0 94,3 đối chứng (Phytophthora palmivora) - 84,3 - Ghi chú:
HQƯC: hiệu quả ức chế
Bảng 3.8. Hiệu quả hạn chế nấm Phytophthora palmivora của các nguồn VSV dạng ựơn chủng và khi tổ hợp trong ựiều kiện nhà lưới (Viện BVTV Ờ 2012)
Tỷ lệ số mồi bẫy mất màu (%)
Công thức
0 ngày 10 ngày 20 ngày 30 ngày
HQ giảm bệnh sau 30 ngày
(%) đC ựất nhiễm
nấm 86,7 94,7a 96,0a 93,3a -
P 9- 1 - 20,7b 25,3b 28,0b 70,0 P 12- 12 - 16,0bc 16,7bc 18,7bc 80,0 T.harzianum - 17,3bc 23,3bc 20,0bc 78,6 Hỗn hợp - 10,7c 13,3c 15,3c 83,6 CV (%) 6,5 5,9 2,5 - Ghi chú:
Các giá trị trong cùng một cột biểu thị bằng các chữ giống nhau sai khác khơng có ý nghĩa ở mức xác suất P>0,5 theo phân tắch DuncanỖs.
để ựánh giá khả năng hạn chế nấm Phytophthora palmivora gây bệnh trên cây sầu riêng của các dòng VSV ựối kháng, thắ nghiệm ựã ựược tiến hành trong nhà lưới Viện Bảo vệ thực vật năm 2012. Số liệu bảng 8 cho thấy 3 loài VSV khi xử lý riêng rẽ hay hỗn hợp ựều có tác dụng hạn chế nấm
Phytophthora palmivora trong nhà lưới thông qua tỉ lệ biến màu của cánh hoa
hồng. Trong ba lồi VSV thì cơng thức xử lý hỗn hợp 3 loài VSV, xạ khuẩn P12-12 và nấm T. harzianum có tác dụng cao nhất trong việc hạn chế nấm
Phytophthora palmivora với tỉ lệ biến màu cánh hoa thu ựược lần lượt là 15,3;
18,7; 20,0% và hiệu quả giảm bệnh là 83,6; 80,0 và 78,6% sau 30 ngày xử lý. Tỉ lệ cánh hoa bị mất màu càng nhỏ chứng tỏ mật ựộ nấm Phytophthora
palmivora trong ựất càng nhỏ. Vi khuẩn P9-1 cũng có tác dụng hạn chế nấm Phytophthora palmivora, tuy nhiên hiệu lực của chúng thấp hơn so với hai
lồi VSV cịn lại với hiệu quả giảm bệnh sau 30 ngày là 70%. Kết quả thắ nghiệm chỉ ra rằng có thể kết hợp các VSV ựối kháng với nhau trong việc sản xuất chế phẩm sinh học ựể tăng thêm hiệu lực của chúng trong việc hạn chế nấm bệnh.