PHẦN III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.2.Thắch nghi chủng virus LMLM typ eO phân lập trên tế bào BHK-
để xác ựịnh lại ựặc tắnh thắch ứng và ổn ựịnh của virus LMLM chủng VP02 trên tế bào dòng chúng tôi ựã cấy chuyển 10 ựời trên tế bào BHK-21. Huyễn dịch virus LMLM type O ựược pha loãng 10-3 và gây nhiễm trên tế bào BHK-21.
Sau mỗi lần cấy truyền, thu nhận huyễn dịch virus ựông tan và chia các tube tương ứng với mỗi lần cấy truyền, sau ựó bảo quản ở âm 800C như mô tả ở phần phương pháp.
TCID50 ựược xác ựịnh như là ựộ pha loãng (hay ựậm ựộ) ở ngưỡng cần thiết của một huyễn dịch virus xác ựịnh vừa ựủ ựể gây nhiễm ựược 50% tế bào cảm thụ. Việc xác ựịnh trị số TCID50 dựa vào tác ựộng huỷ tế bào của virus CPE và việc xác ựịnh ựược CPE trong thắ nghiệm chuẩn ựộ. Quan sát dưới kắnh hiển vi và ựếm số giếng có CPE.
Tiến hành kiểm tra hiệu giá virus trên tế bào BHK-21, kiểm tra hiệu giá TCID50 và tắnh toán theo phương pháp của Spearman Karber. Sự thắch nghi của virus trên tế bào ựược ựánh giá là ổn ựịnh nếu TCID50 ổn ựịnh. Kết quả ựược trình bày ở bảng 3.1 và hình 3.2
Bảng 3.1. Biến ựộng TCID50 của virus LMLM type O chủng VP02 qua 10 lần tiếp truyền liên tục
Số lần tiếp ựời tiếp truyền trên BHK-21
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Hiệu giá TCID50/ml(lg)
4,50 5,70 6,0 6,16 6,60 6,40 6,56 6,75 6,68 7,06
Hình 3.2. Diễn biến hiệu giá virus LMLM VP02 qua các lần tiếp truyền trên tế bào BHK21
Kết quả trên cho thấy, virus LMLM VP02 có khả năng thắch ứng và nhân lên trên tế bào BHK-21, thể hiện ở ựời ựầu hiệu giá mới chỉ dừng lại ở 104,50 TCID50/ml, sau 5 ựời tiếp truyền, hiệu giá virus ựã ựạt ựến 106,60 TCID50/ml; đến lần tiếp truyền thứ 10 hiệu giá virus duy trì và ựạt ngưỡng 107,06 TCID50/ml.
Về mặt hình thái tế bào sau 10 ựời tiếp truyền, bệnh tắch phá hủy rất ựiển hình. Tế bào bị gây nhiễm co tròn, và bong ra nổi trên bề mặt chai nuôi cấy. Hình thái tế bào gây nhiễm ựược thể hiện ở hình 3.3.
(-): tế bào hình thuôn dài, bám ựáy ựều (+): tế bào co tròn, bong, vỡ
Hình 3.3. Hình thái tế bào sau 10 lần tiếp truyền