- Xác ựịnh màu sắc của nguyên liệu và sản phẩm trong quá trình nghiên cứu bằng máy ựo màu MINOTA thể hiện ở 3 chỉ số l, a,b.
- Xác ựịnh hàm lượng chất khô hòa tan bằng refactometer (chiết quang kế) theo TCVN 5610-1991.
- Xác ựịnh ựộ ẩm theo TCVN 5613-1991.
Xác ựịnh ựộ ẩm của sản phẩm bằng cách cân chắnh xác một lượng sản phẩm và sấy ựến khối lượng không ựổi, dựa trên các kết quả thu ựược ựể tắnh ựộ ẩm theo công thức:
(G1 Ờ G2)*100 W% =
G1
W: độ ẩm của sản phẩm
G1: Khối lượng của vật liệu trước khi sấỵ
G2: Khối lượng của vật liệu sau khi sấy ựến khối lượng không ựổị
- Xác ựịnh hàm lượng DNJ bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp: Xác ựịnh DNJ trong lá dâu bằng phương pháp tạo dẫn xuất với 9-fluorenylmethyl chloroformat (FMOC - trên hệ thống HPLC pha ngược.CL)
Phương pháp chuẩn bị mẫu: 10mg của bột lá dâu ựược hòa vào 1ml HCl 0.05N, sau ựó phá mẫu bằng sóng siêu âm. Mẫu sau ựó ựược ly tâm ở tốc ựộ 15000 rpm trong 10 phút. Lấy 100ộl phần dung dịch sau ly tâm pha loãng với 900ộl HCl 0.05N ựể ựược 1ml. Phản ứng FMOC: Lấy 10ộl mẫu sau khi ựã ựược pha loãng và thêm vào 10ộl của dung dịch ựệm Borate Kali 0.4 M (pH 8.5) và 20ộl của dung dịch FMOC-CL 5mM, sau ựó giữ hỗn hợp ở nhiệt ựộ phòng trong 20 phút. Sau ựó thêm vào 10ộl của dung dịch
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 33
Glycine 0.1 M ựể dừng phản ứng và pha loãng bằng cách thêm 950ộl dung dịch axit axetic 0.1%. Sau ựó dùng 10ộl ựể ựưa vào hệ thống HPLC.
Chương trình chạy của HPLC: Pha ựộng trong 20 phút, sau ựó rửa cột bằng metanol trong 10 phút và sau ựó lại tráng cột bằng pha ựộng trong 15 phút.
Thành phần pha ựộng: Hỗn hợp nước (bổ sung 0.2% axit formic) và metanol (bổ sung 0.2% axit formic) theo tỷ lệ 6:4 (v/v).
Tốc ựộ chảy: 0.5 ml/phút.
Loại cột: YMC Pack ODS (C-18), kắch thước hạt là 3ộm.
Bộ phận phát hiện (detector): Huỳnh quang với bước sóng Ex 254/Em 322 nm.
- Phương pháp ựịnh lượng alcaloit toàn phần trong thực vật:
Cân chắnh xác khoảng 10g bột nguyên liệu, thêm 100ml dung dịch axit sulfuric 2%, ựể yên 10 phút, thỉnh thoảng lắc nhẹ. để trong 16 - 18 giờ ở nhiệt ựộ phòng. Lọc lấy 50 ml dịch lọc (tương ựương 5g bột nguyên liệu).
Kiềm hóa dịch lọc bằng NH4OH ựậm ựặc ựến pH = 10. Chuyển dịch lọc vào phễu trắch lỵ Lắc dịch lọc với hỗn hợp chloroform:diethylether (2:1): 20ml x 3 lần (ựến khi dịch trắch ly hết màu). Tập hợp dịch chiết chloroform - diethylether, thêm Na2SO4 khan ựể loại nước. Gạn dịch trắch ly sang cốc khô ựã cân trọng lượng. Bốc hơi dung môi trên cách thủy ựến khô. để cốc trong bình hút ẩm 30 phút và cân nhanh khối lượng của cốc cùng cắn.
Tắnh hàm lượng alcaloit TS trong dịch trắch ly theo công thức sau: A x 100
X% =
M Trong ựó:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 34
A- Là khối lượng alcaloit TS cân ựược (g)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 35
định lượng alcaloit toàn phần trong bột thành phẩm:
Cân chắnh xác khoảng 1g bột thành phẩm, hòa tan trong 40 ml dung dịch axit sulfuric 2%. Lọc lấy 20ml dung dịch (tương ứng với 0.5 g bột).
Các bước tiếp theo và cách tắnh tương tự như ựối với ựịnh lượng alcaloit toàn phần trong bột nguyên liệụ
Tắnh hiệu suất thu hồi alcaloit bột thành phẩm
Lượng alcaloit toàn phần trong bột thành phẩm (g) HS thu hồi
alcaloit (%) = Lượng alcaloit toàn phần trong bột nguyên liệu (g)
x 100
- Xác ựịnh tổng số nấm men, nấm mốc có trong sản phẩm trong quá trình bảo quản theo TCVN 4993-89
* Nguyên tắc: Môi trường dinh dưỡng phải chứa chất ức chế sự phát triển của vi khuẩn.
Cấy lên bề mặt thạch của môt trường Yeast Glucose Chloramphenicol một lượng mẫu ựã ựược pha loãng nhất ựịnh và nuôi ở nhiệt ựộ 25 ổ 1˚C trong ựiều kiện hiếu khắ, thời gian 48-72 giờ.
đếm tất cả số khuẩn lac mọc trên ựó từ ựó suy ra lượng nấm men và nấm mốc có trong mẫu phân tắch.
* Cách tiến hành:
- Pha loãng thập phân mẫu phân tắch ựến nồng ựộ thắch hợp ựể dễ dàng cho việc ựếm khuẩn lạc (mỗi ựĩa chỉ nên có 15-300 khuẩn lạc). Thời gian thao tác không quá 30 phút.
- Lấy 0.05 ml (hay 1 giọt mẫu ựã pha loãng cho vào ựĩa petrị Mỗi ựộ pha loãng nên làm ựồng thời 2-3 hộp và nên làm 2 cấp pha loãng liên tiếp nhau) ựã chứa môi trường thạch dinh dưỡng, tráng ựều trên mặt thạch.
- Lật ngược ựĩa, ựặt vào tủ ấm nhiệt ựộ 25 ổ 1˚C trong thời gian 48-72 giờ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36
*Kết quả:
Sau khi khuẩn lạc ựã mọc, ựếm số lượng khuẩn lạc mọc trên các ựĩa có số lượng nằm trong khoảng 15-300. Nếu ngay ở ựĩa cấy mẫu nguyên chất mà có số lượng ắt hơn 15 khuẩn lạc thì vẫn lấy kết quả ựó (Trần Văn Tài, 2000).
Số lượng vi sinh vật trung bình có trong 1ml hay 1g mẫu ựược tắnh theo công thức:
N = ∑C
(n1+0,1n2).d Trong ựó:
N: số khuẩn lạc/g hay số khuẩn lạc trên ml.
∑C: Tổng các khuẩn lạc ựếm ựược trên tất cả các ựĩa n1:Số ựĩa ựếm ựược ở nồng ựộ pha loãng thứ nhất n2: Số ựĩa ựếm ựược ở nồng ựộ pha loãng thứ hai d: độ pha loãng cho số ựếm thứ nhất
Phương pháp ựánh giá cảm quan
Sử dụng phép thử thị hiếu ựể ựánh giá mức ựộ ưa thắch ựối với sản phẩm (theo thang ựiểm hedonic 1-9).