Đánh giá tác dụng bảo vệ gan của cao lỏng tầm gửi cây Gạo và cây Na trên mô hình gây tổn thương gan thực nghiệm bằng Paracetamol (PAR) [37].
Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 7 lô, mỗi lô 10 con. - Lô 1 (lô chứng): uống nước cất, thể tích 0,2 ml/10g chuột. - Lô 2 (mô hình): uống nước cất + PAR 400mg/kg.
- Lô 3 (chứng dương): uống Silymarin liều 70mg/kg + PAR 400mg/kg.
OD thí nghiệm - OD mẫu trắng OD chứng âm tính
- Lô 4: Uống cao lỏng tầm gửi Gạo (30g dược liệu/kg) + PAR 400mg/kg - Lô 5: Uống cao lỏng tầm gửi Gạo (60g dược liệu/kg) + PAR 400mg/kg. - Lô 6: Uống cao lỏng tầm gửi Na (30g /kg) + PAR 400mg/kg.
- Lô 7: Uống cao lỏng tầm gửi Na (60g /kg) + PAR 400mg/kg.
Các lô chuột được uống nước cất hoặc thuốc thử liên tục trong 7 ngày. Ngày thứ 8 sau khi cho chuột nhịn đói 16 giờ: lô 2, 3, 4, 5, 6 và 7 đồng loạt được uống Paracetamol liều 400mg/kg.
48 giờ sau khi gây độc, giết chuột, lấy máu động mạch cảnh ở tất cả các lô chuột làm xét nghiệm AST, ALT. Lấy gan để cân trọng lượng, quan sát đại thể, làm xét nghiệm vi thể và định lượng MDA dịch đồng thể gan.
Hình 2.3. Sơ đồ nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan và chống oxy hóa trên mô hình gây tổn thương gan bằng paracetamol
* Phương pháp xác định hoạt độ AST, ALT:
- Hoạt độ AST, ALT huyết thanh được đo trên máy xét nghiệm sinh hóa Screen – Master của hãng Hospitex Diagnostic, Italy. Đơn vị tính là UI/l.
* Phương pháp xác định MDA dịch đồng thể gan:
Nguyên lý của phương pháp: MDA là một sản phẩm được tạo ra trong quá trình peroxy hóa lipid màng tế bào gan. MDA phản ứng với acid thiobarbituric để tạo phức trimethine có màu hồng và có đỉnh hấp thụ cực đại ở bước sóng 530- 532nm. Uống thuốc thử N4 N5 N6 N7 N8 N9 N10 N3 N2 N1 Uống PAR Xét nghiệm ngày
Mức độ hấp thụ màu OD (XE) của dung dịch đo tỷ lệ thuận với nồng độ MDA. Hàm lượng MDA được tính theo hệ số chuyển đổi trên đường cong chuẩn sử dụng MDA tinh khiết từ 2 nmol đến 40 nmol. Hệ số sau khi dựng đường cong chuẩn là 28,2.
Tiến hành: cân 0,25g gan chuột nhắt trắng nghiền với 6ml dung dịch KCl 0,12%.
- Bước 1: 1ml dung dịch nghiền từ phủ tạng thêm vào 0,25ml acid ascorbic và 0,25ml muối Mohr.
- Bước 2: Ủ 37oC trong 30 phút lấy ra, cho thêm 0,5ml dung dịch acid tricloacetic vào các ống, ly tâm 3000 vòng/phút trong 10 phút.
- Bước 3: lấy 1ml dịch nổi thêm vào 0,5ml acid thiobarbituric.
- Bước 4: đun sôi cách thủy 20 phút sau đó để lạnh ở nhiệt độ phòng, dung dịch có màu hồng.
- Bước 5: đo quang ở máy ELISA bước sóng 532nm.
Hoạt tính chống oxy hóa của tầm gửi được tính theo công thức sau:
% HTCO = x 100
Trong đó:
- HTCO: Hoạt tính chống oxy hóa, tính bằng %.
- CMDA gây bệnh: nồng độ MDA ở chuột nhiễm độc Paracetamol và uống nước cất.
- CMDA thử: nồng độ MDA ở chuột nhiễm độc Paracetamol và uống tầm gửi cây Gạo hoặc cây Na.
* Xét nghiệm mô bệnh học:
Xét nghiệm mô bệnh học gan chuột được thực hiện tại Bộ môn Giải phẫu bệnh Trường Đại học Y Hà Nội – PGS., TS. Trần Văn Hợp đọc và nhận định kết quả.
CMDA gây bệnh – CMDA thử CMDA gây bệnh