- Dị nguyờn D.pteronyssinus do khoa Miễn dịch Dị nguyờn, Bệnh viện Tai Mũi Họng Trung ương điều chế.
c.Cỏc phương phỏp xỏc định tớnh chất sinh học ♦Kiểm tra độ vụ trựng
♦Kiểm tra độ vụ trựng
Chỳng tụi tiến hành cấy những mẫu DN vào mụi trường nhằm mục đớch phỏt hiện trường hợp nhiễm tạp trựng và nấm mốc.
• Cỏc mụi trường nuụi cấy:
* Mụi trường tỡm vi khuẩn hiếu khớ: + Mụi trường lỏng (pH 7,2 ± 0,2) gồm:
- Canh thang thường: (cao thịt bũ 5g + pepton 10g + NaCl 5g + nước cất vừa đủ 1000 ml).
- Canh thang dextroza: (canh thang thường + 1% dextroza). + Mụi trường đặc: thạch thường (cụng thức trờn + 2,5-3% thạch).
* Mụi trường tỡm vi khuẩn kị khớ:
Cụng thức như canh thang thường cho thờm 4-5g thịt bũ nghiền nhỏ. * Mụi trường tỡm nấm mốc: nước pepton glucoza (pepton 10g + glucoza 20g + nước cất vừa đủ 1000 ml).
• Cỏch tiến hành: Mỗi mẫu DN (0,5 ml) được cấy vào 3 mụi trường, mỗi mụi trường 3 mẫu. Với trường hợp tỡm vi khuẩn, cần để tủ ấm 370 C, theo dừi trong 7 ngày. Với trường hợp tỡm nấm mốc thỡ để ở nhiệt độ phũng và theo dừi 14 ngày. Mẫu được coi là vụ trựng nếu sau thời gian quy định khụng phỏt hiện thấy vi khuẩn hoặc nấm trờn cỏc mụi trường.
♦. Thửđộ an toàn
Dựng chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả hai giống đực-cỏi khỏe mạnh, trọng lượng 15-20 g/con, chia ngẫu nhiờn thành 3 lụ, 10 con/lụ.
41
* Lụ chứng: Tiờm dưới da bụng dung dịch hũa loóng DN (dung mụi) hoặc nước muối sinh lý, 0,5 ml/con.
* 2 lụ thử nghiệm:
+ Lụ thử nghiệm thứ I: tiờm dưới da bụng dung dịch DN 10 PNU/ml (0,5 ml/con).
+ Lụ thử nghiệm thứ II: tiờm dưới da bụng dung dịch DN 100 PNU/ml (0,5 ml/con).
Theo dừi tỡnh trạng chung sau khi tiờm, sự thay đổi trọng lượng chuột và số lượng chuột chết sau 5 ngày, 10 ngày.
♦. Thửđộc tớnh cấp:
Tớnh LD50 trờn chuột nhắt trắng theo đường tiờm dưới da (phương phỏp Lichfield – Wilxon).
50 chuột nhắt trắng khỏe mạnh, 15 – 20 g/con, chia làm 5 lụ, 10 con/lụ. * 1 lụ chứng được tiờm dưới da bụng dung dịch pha loóng DN, 0,4 ml/10 g thể trọng chuột.
* 4 lụ thử nghiệm được tiờm dưới da bụng dung dịch DN 10.500 PNU/ml theo liều tăng dần từ 0,1 đến 0,4 ml/10g thể trọng chuột.
Theo dừi tỡnh trạng chung của chuột và tỉ lệ chuột chết ở mỗi lụ trong 72 giờ.