- Dị nguyờn D.pteronyssinus do khoa Miễn dịch Dị nguyờn, Bệnh viện Tai Mũi Họng Trung ương điều chế.
b. Cỏc phương phỏp xỏc định tớnh chất húa sinh
Xỏc định pH bằng mỏy tựđộng.
Định lượng Protein theo phương phỏp đo độđục
Định lượng nitơ bằng phương phỏp micro Kjeldahl
* Nguyờn lý: Dựng axit sulfuric đậm đặc vụ cơ húa nguyờn liệu. Cỏc chất hữu cơ bị đốt chỏy thành CO2, H2O. Cũn nitơ được chuyển thành sulfat amon (NH4)2SO4. Cho NaOH tỏc dụng với (NH4)2SO4 sẽ giải phúng NH3.
39
NH3 bốc theo hơi nước chuyển tới một bỡnh đựng H2SO4 chuẩn độ. Chuẩn độ
H2SO4 thừa bằng NaOH chuẩn độ.
Làm song song một mẫu trắng để kiểm tra lượng nước, khụng khớ và thuốc thử. Hiệu số giữa kết quả chuẩn độ của mẫu thử và mẫu trắng bằng lượng axit thực tế đó phản ứng với NH3 giải phúng từ nguyờn liệu đó vụ cơ
húa. Từđú tớnh ra lượng nitơ trong nguyờn liệu.
Định lượng nitơ protein cú thờm giai đoạn kết tủa và tỏch protein ra khỏi cỏc hợp chất nitơ khụng phải protein. Cú nhiều chất làm kết tủa protein nhưng thường dựng là axit tricloaxetic.
* Thuốc thử: 1) Axit tricloaxetic 10%; 2% 2) Axit sulfuric đậm đặc 3) Hỗn hợp xỳc tỏc: CuSO4 1 phần + K2SO4 2 phần 4) Axit sulfuric N/50 5) Hydroxyt natri N/50
6) Chỉ thị màu Tashiro: khi dựng nhỏ riờng tứng dung dịch: - đỏ metyl 0,1% trong cồn : 2 phần
- xanh metylen 0,1% trong cồn : 1 phần
Chỉ thị màu Tashiro chuyển từ tớm sang xanh lỏ cõy 7) Phenolphtalein 1% trong cồn
8) NaOH 40%
9) Dung dịch mẫu axalat amon 0,411 g% (1 ml chứa 1 mg nitơ)
* Mục đớch để xỏc định hàm lượng nitơ protein trong 1ml dịch chiết, biểu thị kết quả theo đơn vị PNU.
Phõn tớch thành phần axit amin bằng mỏy phõn tớch axit amin tự động(Aminoquant - 1090 - Germany)
* Cấu tạo, hoạt động của mỏy gồm: 1 cột phõn tớch axit amin (analysis column), cột guard column cartridges, pha tĩnh là chất mồi chứa trong cột,
40
pha động gồm 2 kờnh A và B nối với nhau bằng đệm axetat natri, tốc độ dũng 0,45 ml/phỳt.
* Nguyờn lý: (Theo phương phỏp Natenson) Axit amin cho màu với natri-β- naphtoquinon-4-sulfonat, cú thểđịnh lượng bằng quang kế.