a) Đặc điểm nuôi cấy
Chủng vi khuẩn KNUC213 có hoạt tính chitinase cao đƣợc nuôi cấy trên các môi trƣờng thạch LB, MS1, MS2, MS3 và nuôi trong 37o
C. Hình thái khuẩn lạc và khả năng phát triển của vi khuẩn đƣợc quan sát sau 24 giờ và 48 giờ nuôi cấy.
b) Đặc điểm hình thái tế bào
Chủng vi khuẩn KNUC213 đƣợc nuôi trong môi trƣờng lỏng MPA ở nhiệt độ 37oC trên máy lắc tốc độ 200 vòng/phút trong thời gian 18 20 giờ. Tế bào vi khuẩn trong dịch nuôi cấy đƣợc cố định trên tiêu bản để quan sát hình dạng tế bào dƣới kính hiển vi quét.
c) Ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy
Để xác định khả năng phát triển của vi khuẩn ở các nồng độ muối khác nhau, vi khuẩn đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng MPA bổ sung nồng độ NaCl tăng dần từ 1 ÷ 10 % ở 37oC. Quan sát sự phát triển của vi khuẩn trên môi trƣờng sau 1 ÷ 3 ngày nuôi cấy.
Để xác định dải nhiệt độ và pH thích hợp cho sinh trƣởng của vi khuẩn, chủng vi khuẩn KNUC213 đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng MPA ở các nhiệt độ khác nhau (22o
C; 30oC; 37oC và 45oC) và dải pH khác nhau (từ pH 3,0 ÷ pH 10,0). Quan sát sự phát triển của vi khuẩn trên môi trƣờng sau 1 ÷ 3 ngày nuôi cấy.
d) Xác định đặc điểm sinh lý và sinh hóa bằng kit API 50CHB
Chủng vi khuẩn KNUC213 sau khi xác định đặc điểm hình thái cho kết quả là các chủng vi khuẩn Gram (+), tạo bào tử trên môi trƣờng có bổ sung MnSO4. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn sử dụng bộ kit API 50CHB (bằng
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
phần mềm APILAB plus). Lấy 200 µl dịch huyền phù vi khuẩn bổ sung vào 10 ml môi trƣờng API AUX. Sau đó dịch môi trƣờng khoáng có chứa vi khuẩn đƣợc bổ sung vào các giếng thử của bộ kit. Dùng dầu parafin phủ kín lên bề mặt các giếng. Đậy bộ kít và nuôi ở nhiệt độ 37C. Đọc kết quả sau 24 và 48 giờ. So sánh kết quả thu đƣợc với bảng chuẩn phân loại API bằng phần mềm APILAB plus.