Sản phẩm PCR khuếch đại gen chi đã tinh sạch đƣợc gắn vào vector
tách dòng pJET1.2/blunt nhằm tạo plasmid pJET1.2/blunt::chi và biến nạp vào E. coli XL1-blue. Kết quả kiểm tra plasmid tách từ các dòng tế bào E. coli XL1-blue khi nuôi cấy trên môi trƣờng LB/ampicillin 100 µg/ml đƣợc thể
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.5. Điện di đồ kiểm tra plasmid tái tổ hợp tách từ tế bào E. coli XL1- blue. (Đƣờng chạy 1: sản phẩm plasmid pJET1.2/blunt::chi vàđƣờng chạy 2, 3: Sản phẩm
plasmid pJET1.2/blunt (đối chứng âm)).
Kết quả trên hình 3.5 cho thấy, sau quá trình biến nạp đã chọn đƣợc các dòng tế bào E. coli XL1-blue mang plasmid tái tổ hợp pJET1.2/blunt::chi ở
đƣờng chạy số 1 do plasmid này có kích thƣớc lớn hơn các plasmid ở đƣờng chạy số 2 và 3 là các plasmid gốc pJET1.2/blunt không chƣa đoạn chèn (đƣợc sử dụng làm đối chứng âm). Plasmid tái tổ hợp pJET1.2/blunt::chi tiếp tục kiểm tra bằng cách xử lý với hai enzyme giới hạn NotI và XbaI. Kết quả kiểm tra sản phẩm cắt sau quá xử lý pJET1.2/blunt::chi với hai enzyme giới hạn trên bản điện di gel agarose 1,0 % đƣợc thể hiện trên hình 3.6.
Hình 3.6. Điện di đồ kiểm tra sự có mặt gen chi của chủng B. licheniformis KNU213 trong vector tách dòng pJET1.2/blunt::chi. (Đƣờng chạy
1: plamid pJET1.2/blunt::chi đƣợc xử lý bởi hai enzyme giới hạn NotI và XbaI và Đƣờng
chạy M: Thang DNA chuẩn (0,25-10kb)).
Kết quả điện di đồ thể hiện trên hình 3.6 cho thấy, sản phẩm sau quá trình cắt plasmid ở đƣờng chạy số 1 cho hai băng DNA có kích thƣớc tƣơng ứng là 1,7 kb và 3,0 kb. Băng DNA có kích thƣớc 3,0 kb tƣơng ứng với kích thƣớc vector pJET1.2/blunt khi chƣa mang đoạn gen chi, và đoạn DNA có
kích thƣớc 1,7 tƣơng ứng với kích thƣớc gen chi sử dụng gắn vào vector
pJET1.2/blunt. Kết quả trên cho thấy gen chi đã đƣợc gắn vào vector tách
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
giải trình tự hai chiều đối với gen chi nhờ sử dụng cặp mồi pJET1.2F và
pJET1.2R.