Chương 2: đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5.2. Nghiên cứu khảo sát tình hình nhiễm mầm bệnh KST ở rau sống
* Thiết kế nghiên cứu:
- Lấy mẫu phân tầng: trong huyện Triệu Sơn chọn 3 xã và 3 chợ ựể nghiên cứu.
- Số lượng mẫu lấy theo công thức dịch tễ học: (1,96)2x p x (1-p) N =
d2
(Theo Nguyễn Như Thanh và cộng sự, 2001) Trong ựó:
P: Tỷ lệ ước ựoán d: Sai số = 0,05
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 29
Trong nghiên cứu của mình, chúng tôi sử dụng tỷ lệ ước ựoán dựa vào kết quả nghiên cứu của tác giả Lê Thị Tuyết năm 2005 tại Thái Bình, theo ựó tỷ lệ rau nhiễm mầm bệnh KST là 50%. Áp dụng vào công thức trên cỡ mẫu cần lấy tối thiểu là 384 mẫu. Chia ựều cho 8 loại rau nghiên cứu thì mỗi loại rau cần lấy 48 mẫu. Như vậy mỗi loại rau ở sẽ lấy 24 mẫu ở nơi sản xuất và 24 mẫu ở các chợ.
- Phương pháp lấy mẫu:
Tại nơi sản xuất: mỗi mẫu lấy khoảng 200gam, ựến ngày thu hoạch, lấy vào buổi sáng, lấy ở nhiều vị trắ khác nhau cho ựủ khối lượng cần thiết. Mỗi mẫu rau ựược ựựng trong túi nilon có dán nhãn ghi các thông tin: Ngày lấy, nơi lấy, ựặc ựiểm của khu vực lấy mẫu, làm xét nghiệm trong vòng 24 giờ.
Tại nơi tiêu thụ: chọn mua rau ở các hàng khác nhau, mỗi mẫu rau cũng mua khoảng 200 gam và ựựng trong túi nilon có ghi các thông tin và tiến hành tương tự như ở nơi sản xuất.
- Xét nghiệm rau tìm ấu trùng giun bằng phương pháp rửa rau và ly tâm nước rửa.
- Xét nghiệm rau nước tìm ấu trùng sán lá gan lớn và sán lá ruột lớn bằng phương pháp nạo vét bề mặt thân và cọng rau trong nước, ly tâm nước rửa rau, tìm ấu trùng.
+ Nhận biết ấu trùng sán lá qua hình thái cấu tạo của ấu trùng: Sán lá gan lớn: hình tròn, 3 lớp vỏ, ựường kắnh: 0,82 ổ 0,014 mm, màu nâu
sẫm, bên trong chứa 56 tế bào phôi xếp hình quả dâu (dẫn theo NguyễnVăn Thọ, 2005)
Sán lá ruột lớn: Hình tròn, 3 lớp vỏ, ựường kắnh: 0,23 ổ 0,003 mm, màu vàng, bên trong chứa 56 tế bào phôi xếp hình quả dâu (Nguyễn Văn Thọ, 2005)
- Xét nghiệm rau tìm trứng giun của các loại chủ yếu truyền lây giữa ựộng vật và người qua rau sống bằng phương pháp của đặng Văn Ngữ (dẫn theo đỗ Dương Thái và cộng sự, 1975).
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 30
+ Cách làm: mẫu rau sau khi lấy về, nhặt sạch sẽ, bỏ phần già và úa, rửa từng lá, cọng rau dưới vòi nước chảy, thu nước của từng lần rửa (4 lần), ựể riêng, lọc qua vải màn 2 lớp, ựể lắng 4 giờ. Gạn bỏ phần nước trong, lấy cặn ly tâm bằng máy ly tâm quay tay trong 2 phút. Gạn bỏ bớt nước trong trong ống nghiệm từ máy ly tâm, dùng ựũa thủy tinh quấy ựều phần nước cặn rồi ựổ hết vào ựĩa Petri. Dùng công tơ hút hút lượng nước rửa vừa phải ựưa lên lam kắnh, soi trên kắnh hiển vi; tìm ấu trùng và trứng, phân loại trứng.
Khóa phân loại một số trứng và ấu trùng giun sán ở người và truyền lây từ ựộng vật sang người theo Mỏgum (dẫn theo Trịnh Văn Thịnh, 1963; đỗ Dương Thái, 1978):
+ Trứng giun ựũa người (Ascaris lumbricoides): hình ovan, 4 lớp vỏ, lớp ngoài cùng xù xì, màu vàng trong chứa 1 tế bào phôi, kắch thước 75 x 50 ộm.
+ Trứng giun tóc người (Trichuris trichuris): hình hạt chanh, vỏ dày,
màu vàng ựậm, trong chứa 1 tế bào, kắch thước 50 x 22 ộm.
+ Trứng giun móc người (Ancylostoma duodonal): hình bầu dục, không màu, vỏ mỏng, nhẵn, trong suốt, trong chứa 1 ựến nhiều tế bào, kắch thước 60 x 40 ộm.
+ Trứng giun ựũa lợn (Ascaris suum): hình ovan, màu cánh dán, 4 lớp vỏ dày, lớp ngoài cùng xù xì gợn sóng, kắch thước 85 x80 ộm.
+ Trứng giun tóc lợn (Trichuris suis): hình hạt chanh, màu vàng thẫm, bên trong chứa 1 tế bào, kắch thước 0,055 x 0,025 mm.
+ Vỏ trứng mỏng và ựều có 1 màng bọc, kắch thước 0,055 x 0,035 mm
là Strongyloides ransomi.
+ Trứng giun tóc chó (Trichuris vulpis) màu vàng nhạt, hình hạt chanh, chỉ chứa 1 tế bào phôi, kắch thước 75 x 45 ộm.
+ Trứng Toxocara leonine: hình ovan, vỏ dày, vỏ ngoài nhẵn, màu
vàng, chỉ chứa 1 tế bào phôi, kắch thước 80 x 70 ộm.
+ Trứng Toxocara canis: hình ovan, vỏ dày, lớp ngoài xù xì, màu vàng nhạt, chỉ chứa 1 tế bào phôi, kắch thước 80 x 75 ộm.
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 31
+ Trứng giun móc chó (Ancylostoma caninum), không màu, hình bầu dục, trong trứng có 1 ựến nhiều tế bào phôi, kắch thước 60 x 40 ộm.
+ Trứng Neoascaris vitulorum: vỏ dày, lổn nhổn, màu vàng nhạt, chỉ
chứa 1 tế bào phôi, kắch thước 80 x 95 ộm.
+ Trứng có vỏ mỏng > 0,130 mm, có nắp, chứa 1 morula (hình quả dâu), màu vàng nhạt là Fasciola hepatica.
+ Trứng giun ựũa lợn và trứng giun ựũa người: xác ựịnh chung là trứng giun ựũa vì chúng rất giống nhau về mặt hình thái.
+ Trứng giun tóc người và trứng giun tóc gia súc: xác ựịnh chung + Trứng giun ựũa chó mèo: xác ựịnh qua ựặc ựiểm hình thái
+ Trứng giun móc chó mèo và trứng giun móc người: xác ựịnh chung - đánh giá cường ựộ nhiễm trứng, ấu trùng giun trên 100 g rau:
+ Cách làm: cân 100 g rau ựã nhặt sạch sẽ, rửa từng cọng, lá rau dưới vòi nước chảy, thu nước rửa, lọc qua vải màn 2 lớp, ựể lắng 4 giờ. Gạn bỏ phần nước trong, lấy cặn ly tâm bằng máy ly tâm quay tay trong 2 phút. Gạn bỏ bớt nước trong trong ống nghiệm từ máy ly tâm, dùng ựũa thủy tinh quấy ựều phần nước cặn rồi ựổ hết vào ựĩa Petri. Dùng công tơ hút hút lượng nước rửa vừa phải ựưa lên lam kắnh, soi trên kắnh hiển vi, tìm, phân loại trứng, ựếm số lượng từng loại trứng và ấu trùng trên tất cả các vi trường. Làm ựến khi hết nước rửa.