CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2.6. So sánh tần số khuếch đại và khảo sát mồi đặc hiệu
Sau khi tìm ra được thành phần và chương trình chạy cho mồi đặc hiệu, chúng tôi tiến hành so sánh tần số khuếch đại của phân đoạn 1500 bp liên quan đến khả năng chịu nóng ẩm cao khi sử dụng mồi đặc hiệu và mồi ISSR. Kết quả được trình bày ở bảng 16:
Bảng 16. So sánh tần số khuếch đại của phân đoạn 1500bp khi sử dụng hai loại mồi (%)
Khuếch đại đoạn DNA kích thước 1500 bp Sử dụng mồi đặc hiệu Sử dụng mồi ISSR
Tần số khuếch đại 20/20 17/20
Tỷ lệ (%) 100,0 85,0
Từ bảng 16 cho thấy, mồi đặc hiệu khuếch đại được 20/20 mẫu, đạt 100%, còn mồi ISSR 17/20 mẫu cho sản phẩm, đạt 85%. Như vậy, tần số khuếch đại đoạn DNA kích thước 1500 bp ở mồi đặc hiệu cao hơn mồi ISSR 15%. Kết quả nhận được của chúng tôi lặp lại kết quả đã công bố về chỉ thị phân tử liên quan đến năng suất chất lượng tơ kén của tằm dâu [6], [19], như vậy có thể thấy rằng mồi đặc hiệu có độ nhậy cao hơn mồi ISSR.
Sau đó, mồi đặc hiệu tiếp tục được kiểm tra đánh giá trên 3 dòng tằm có khả năng chịu nóng ẩm cao và 3 dòng không có khả năng này. Kết quả nhận được trình bày ở bảng 17. Bảng 17 cho thấy, tần số xuất hiện của phân đoạn 1500bp trên các cá thể của mỗi dòng tằm đều đạt 100% ở những dòng có khả năng chịu nóng ẩm cao, còn ở những dòng không có khả năng này thì phân đoạn 1500bp không khuếch đại.
Nguyễn Thị Lan 74
Bảng 17. Tần số suất hiện phân đoạn 1500bp trên các dòng tằm Khả năng chịu nóng ẩm cao
Có khả năng Không có khả năng Tần số xuất hiện của phân
đoạn 1500bp trên các cá thể của mỗi dòng tằm
30/30 0
Tỷ lệ (%) 100,0 0
Với những kết quả nhận được như trên có thể thấy rằng phân đoạn 1500bp liên quan đến tính trạng về khả năng chịu nhiệt độ và ẩm độ cao của giống tằm và cặp lai. Do vậy, phân đoạn 1500bp được coi là chỉ thị phân tử liên quan đến tính trạng chống chịu này.
Tiếp theo, chỉ thị phân tử TD1500 được khảo sát trên 20 mẫu giống tằm trong đó có 5 cặp lai tam nguyên (là cặp lai có sự tham gia của giống có khả năng chịu nóng ẩm cao), kết quả trình bày trên hình 23. Hình 23 cho thấy, phân đoạn 1500bp được khuếch đại trên 100% mẫu khảo sát, đạt tỷ lệ tuyệt đối. Kết quả của chúng tôi phù hợp với số liệu của đơn vị quản lý, đánh giá giống theo phương pháp truyền thống. Do đó, chỉ thị TD1550 có thể dùng để đánh giá khả năng chịu nhiệt, ẩm độ cao của giống tằm và cặp lai.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
1500bp
Hình 23. Ảnh điện di sản phẩm PCR
M: Marker 1kb của fermentas 1-15: Mẫu giống tằm có khả năng chịu ẩm và nhiệt độ cao
16-20: Các mẫu cặp lai tam nguyên
Nguyễn Thị Lan 75
Chỉ thị phân tử TD1500 được tiếp tục đánh giá sự di truyền trên các thế hệ và kết quả trình bày ở hình 24.
Kết quả hình 24 cho thấy, chỉ thị phân tử TD1500 được di truyền từ thế hệ bố mẹ sang F1 tam nguyên, khi được khuếch đại ở tất cả các mẫu giống.
Như vậy với những kết quả nhận được về tần số xuất hiện cao nhất, đạt 100% của chỉ thị phân tử TD1500 và sự di truyền của chúng qua các thế hệ, có thể khảo nghiệm nhằm đưa vào sử dụng trong công tác giống, để tuyển chọn giống và cặp lai theo tính trạng chống chịu nóng ẩm cao bằng chỉ thị phân tử.
Theo phương pháp truyền thống, để đánh giá năng suất chất lượng tơ kén và khả năng chống chịu nóng ẩm cao của giống và cặp lai cần khoảng thời gian dài nuụi tằm, theo dừi cỏc chỉ tiờu bằng phương phỏp thường quy như đếm số tằm, đếm và cân số kén thu được của từng lô, của các giống bố mẹ, các cặp lai… nên bị ảnh hưởng rất lớn bởi ngoại cảnh, trong khi đó sử dụng marker phân tử chỉ cần 1 đến 2 ngày đã có thể biết được kết quả. Như vậy đánh giá giống bằng chỉ thị phân tử sẽ nhận được kết quả nhanh hơn so với phương pháp truyền thống, lại không bị ảnh hưởng bởi các yếu tố bên ngoài. Đây là những kết quả nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam theo hướng này, có thể sử dụng để tuyển chọn giống tằm có khả năng chịu nóng ẩm cao.
1500bp
Hình 24. Ảnh điện di sản phẩm PCR
M: Marker 1kb của fermentas 1-10: Mẫu giống bố 11-20: Mẫu giống mẹ
21-40: Mẫu F1 tam nguyên
21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 M 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Nguyễn Thị Lan 76