- Thực hiện TN theo cỏch cải tiến dễ thực hiện và kết quả chớnh xỏc hơn.
Vớ dụ 2: Thực hành: Tỏch chiết ADN (bài 12)
* Mục tiờu
Sau khi thực hành bài này, HS phải:
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Tự tiến hành TN theo qui trỡnh đó cho trong SGK.
* Thực hiện TN theo SGK
a. Chuẩn bị TN - Mẫu vật:
+ Dứa tươi: 1 quả.
+ Gan gà tươi: 1 bộ (hoặc gan lợn). - Dụng cụ, húa chất
+ Dao, thớt để thỏi: 1 cỏi. + Ống đong: 3 cỏi.
+ Ống nghiệm (1-1,5 ì 10-15 cm): 5 ống. + Mỏy xay sinh tố (hoặc cối, chày sứ): 1 cỏi. + Phễu (hoặc lưới lọc): 3 cỏi.
+ Giấy lọc: 3 cỏi.
+ Que tre (0,5 ì 10 cm): 1 cỏi. + Nước rửa bỏt: 50 ml.
+ Cồn 70o: 100 ml. + Nước cất: 500 ml.
b. Tiến hành thớ nghiệm - Bước 1: Nghiền mẫu vật
(1) Loại bỏ lớp màng bao bọc gan: dựng dao cắt bỏ lớp màng bao bọc phớa ngoài gan.
(2) Thỏi nhỏ gan: Thỏi nhỏ gan thành những miếng nhỏ để thuận tiện cho việc nghiền nỏt gan.
(3) Nghiền gan: Cho gan vào cối nghiền mạnh hoặc mỏy xay sinh tố để tỏch rời và phỏ vỡ cỏc tế bào gan. Nếu nghiền gan trong mỏy xay sinh tố thỡ
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
khi nghiền gan phải cho một lượng nước lạnh gấp đụi lượng gan nghiền. Nếu nghiền bằng cối sứ thỡ sau khi nghiền phải cho một lượng nước gấp đụi lượng gan nghiền rồi khuấy đều.
(4) Lọc dịch nghiền: Lọc qua giấy lọc hoặc vải màn hoặc bằng lưới lọc để loại bỏ cỏc phần xơ và lấy dịch lỏng.
(5) Chuẩn bị nước cốt dứa: dứa tươi gọt sạch, thỏi nhỏ và nghiền nỏt bằng mỏy xay sinh tố hoặc bằng chày cối sứ, sau đú lọc lấy nước cốt bằng lưới lọc hoặc giấy lọc và cho vào ống nghiệm sạch.
- Bước 2: Tỏch ADN ra khỏi tế bào và nhõn tế bào
(6) Cho dịch lọc gan vào ống nghiệm: Lấy một lượng dịch lọc gan cho vào ống nghiệm.
(7) Cho nước rửa chộn bỏt vào ống nghiệm: Cho thờm vào ống nghiệm đang cú dịch lọc gan một lượng nước rửa chộn bỏt với khối lượng khoảng
61 1
khối lượng dịch nghiền tế bào.
(8) Khuấy dung dịch trong ống nghiệm: Dựng que thủy tinh đưa lờn, đưa xuống nhịp nhàng trong ống nghiệm, trỏnh khuấy mạnh làm xuất hiện bọt. Rồi để yờn trong 15 phỳt trờn giỏ ống nghiệm.
(9) Chia hỗn hợp dịch nghiền tế bào đó được xử lớ bằng chất tẩy rửa vào cỏc ống nghiệm.
(10) Cho nước cốt dứa vào ống nghiệm: Cho tiếp vào ống nghiệm đang chứa dịch gan và nước rửa bỏt một lượng nước cốt dứa bằng (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
61 1
hỗn hợp dịch nghiền tế bào gan trong ống nghiệm và khuấy thật nhẹ. Để ống nghiệm trờn giỏ trong khoảng thời gian từ 5 - 10 phỳt.
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
(11) Cho cồn vào ống nghiệm: Nghiờng ống nghiệm và rút cồn 700 dọc theo thành ống nghiệm một cỏch cẩn thận sao cho cồn tạo thành một lớp nổi trờn bề mặt hỗn hợp với một lượng bằng dịch nghiền cú trong ống nghiệm. Để ống nghiệm trờn giỏ trong khoảng 10 phỳt và quan sỏt lớp cồn trong ống nghiệm. Chỳng ta cú thể thấy cỏc phõn tử ADN kết tủa lơ lửng trong lớp cồn dưới dạng cỏc sợi trắng đục.
- Bước 4: Tỏch ADN ra khỏi lớp cồn
(12) Tỏch ADN ra khỏi lớp cồn: Dựng que tre đưa vào trong lớp cồn, khuấy nhẹ cho cỏc phõn tử ADN bỏm vào que tre rồi vớt ra và quan sỏt.
c. Kết quả và nhận xột
- Lượng AND tỏch được ớt nờn rất khú quan sỏt.
- Khối trắng đục thu được cú dạng sợi, đõy chủ yếu là prụtờnin, trong đú cú cả ADN.
- Thời gian thực hiện TN khoảng 40 phỳt.
* Cỏc khú khăn gặp phải khi tiến hành thớ nghiệm
- Thiếu một số dụng cụ: Qủa búp cao su, giỏ để ống nghiệm, que thủy tinh.
- Tiến hành: trỡnh bày khụng hợp lớ bước chuẩn bị nước cốt dứa.
- Do rút chất vào ống nghiệm chỉ nhỡn để định lượng nờn độ chớnh xỏc khụng cao, dễ dẫn đến rút quỏ nhiều hoặc quỏ ớt.
- Lượng chất tẩy rửa ớt so với lượng dịch tế bào, lượng nước cốt dứa ớt so với hỗn hợp dịch tế bào và chất tẩy rửa nờn tỏch chiết được ớt ADN.
* Đề xuất cỏch khắc phục khú khăn của thớ nghiệm
Để khắc phục khú khăn khi thực hiện thớ nghiệm, chỳng tụi đề xuất phương ỏn thay đổi TN như sau:
Số húa bởi Trung tõm Học liệu – Đại học Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Bổ sung thờm dụng cụ: Qủa búp cao su, pipet, giỏ để ống nghiệm và que thủy tinh.
- Dựng pipet cú chia vạch để định lượng chớnh xỏc cỏc chất cho vào ống nghiệm. Mỗi chất dựng một pipet riờng.
- Chuẩn bị nước cốt dứa vào bước 1: Nghiền mẫu vật.
(13) Dựng pipet hỳt lượng chất tẩy rửa bằng 1/2 lượng dịch nghiền tế bào. Khuấy nhẹ, để yờn 15 phỳt.
( 14) Dựng pipet hỳt lượng nước cốt dứa bằng 1/2 lượng dịch nghiền tế bào và chất tẩy rửa cú trong ống nghiệm. Khuấy nhẹ, để yờn 10 – 15 phỳt.
* Tiến hành TN theo đề xuất