3.5. Áp dụng thực tế
3.5.2. Hàm lƣợng các hctn trong các mẫu thực tế
Áp dụng phương pháp LC-MS/MS để phân tích các HCTN trong các mẫu thực tế (mẫu cây thuốc và mẫu thực phẩm chức năng) quan tâm theo các quy trình phân tích đã xây dựng đƣợc (sử dụng các điều kiện thí nghiệm thích hợp đã tìm đƣợc): Xác định đồng thời hypophyllanthin và phyllanthin (quy trình phân tích ở hình 3.15); Xác định đồng thời tanshinone I, cryptotanshinone và tanshinone IIA (quy trình phân tích ở hình 3.19); Xác định eurycomanone (quy trình phân tích ở hình 3.20).
87
(i) Hàm lượng hypophyllanthin và phyllanthin trong cây Diệp hạ châu và thực phẩm chức năng:
Kết quả ở bảng 3.19 cho thấy (sắc đồ đối với mẫu DHC-VX đƣợc nêu ở hình 3.33):
- Đối với cây Diệp hạ châu: Hàm lƣợng hypophyllanthin dao động trong khoảng 0,0029 đến 0,2748 mg/g và phyllanthin dao động trong khoảng 0,0039 đến 0,0439 mg/g (phụ lục B7).
- Đối với các mẫu thực phẩm chức năng bào chế từ cây Diệp hạ châu: Hàm lƣợng hypophyllanthin dao động trong khoảng 0,0599 đến 0,6602 mg/g và phyllanthin dao động trong khoảng 0,0805 đến 1,9056 mg/g (phụ lục B8). Đáng tiếc rằng, hiện nay, trên nhãn các loại thực phẩm chức năng đó, không có thông tin gì về hàm lượng HCTN hypophyllanthin và phyllanthin. Mặt khác, ở nước ta hiện nay, cũng chƣa có công bố nào về hàm lƣợng hypophyllanthin và phyllanthin trong các loại thực phẩm chức năng đang lưu hành trên thị trường. Do vậy, theo chủ quan của chúng tôi, các kết quả thu đƣợc ở dây có giá trị tham khảo tốt cho ngành y-dược ở nước ta.
Bảng 3.19 cũng cho thấy, cả 2 phương LC-MS/MS và UPLC-DAD đều cho kết quả hàm lƣợng hypophyllanthin và phyllanthin trong các mẫu nhƣ nhau. Điều này cũng cho phép khẳng định rằng, mặc dù đạt đƣợc độ lặp lại kém hơn, nhƣng phương pháp UPLC-DAD vẫn đạt được độ đúng tốt khi so với phương pháp LC- MS/MS (nếu chấp nhận rằng, phương pháp LC-MS/MS là phương pháp chuẩn).
Như vậy, ngoài phương pháp LC-MS/MS, có thể chọn phương pháp UPLC-DAD (phương pháp có chi phí thiết bị rẻ hơn) để phân tích đồng thời hypophyllanthin và phyllanthin trong các loại mẫu cây Diệp hạ châu và thực phẩm chức năng đƣợc bào chế từ nó.
Hình 3.33. Sắc đồ của mẫu DHC-VX
Hypophyllanthin Phyllanthin
88
Bảng 3.19. Hàm lƣợng (mg/g) hypophyllanthin và phyllanthin trong các mẫu thực phẩm chức năng bào chế từ cây Diệp hạ châu(*)
Mẫu
LC-MS/MS UPLC-DAD
Hypophyllanthin Phyllanthin Hypophyllanthin Phyllanthin DHC-VX 0,1364 ± 0,0003 0,3249 ± 0,0005 0,135 ± 0,002 0,321 ± 0,009 DHC-DH 0,0607 ± 0,0002 0,1044 ± 0,0003 0,059 ± 0,001 0,096 ± 0,003 DHC-PNC 0,1197 ± 0,0012 0,4952 ± 0,0003 0,119 ± 0,001 0,420 ± 0,005 DHC-PV 0,3007 ± 0,0012 1,1547 ± 0,0006 0,299 ± 0,002 1,149 ± 0,012 DHC-DD5 0,0599 ± 0,0003 0,0805 ± 0,0009 0,059 ± 0,001 0,079 ± 0,002 DHC-KH 0,6602 ± 0,0008 1,9056 ± 0,0006 0,660 ± 0,001 1,901 ± 0,011
Lá 0,2748 ± 0,0004 0,0439 ± 0,0004 - -
Thân 0,0167 ± 0,0004 0,0051 ± 0,0003 - -
Rễ 0,0029 ± 0,0002 0,0039 ± 0,0002 - -
(*) Các kết quả trong bảng là trung bình số học (mg/g) ± độ lệch chuẩn (mg/g);
89
Hình 3.34. Sắc đồ của mẫu lá Diệp hạ châu
(ii) Hàm lượng tanshinone I, cryptotanshinone và tanshinone IIA trong cây Đan Sâm:
Kết quả ở bảng 3.20 cho thấy (sắc đồ đối với mẫu DS-Sapa đƣợc nêu ở hình 3.35):
- Đối với cây Đan sâm: Hàm lƣợng lƣợng tanshinone I dao động trong khoảng 1,2717 đến 4,4286 mg/g; hàm lƣợng cryptotanshinone dao động trong khoảng 2,8630 đến 8,1589 mg/g và hàm lƣợng tanshinone IIA dao động trong khoảng 3,8278 đến 13,0252 mg/g khối lƣợng khô (ppm) (phụ lục B9). Các kết quả cũng cho thấy rằng ở các vùng dƣợc liệu khác nhau, hàm lƣợng các chất cũng khác nhau, trong đó dƣợc liệu ở Lâm Đồng hàm lƣợng các chất cao đồng đều nhau. Dƣợc liệu Đan sâm ở vùng núi phía Bắc có chất lƣợng khá tốt. Do vậy, theo chủ quan của chúng tôi, các kết quả thu đƣợc ở dây có giá trị tham khảo tốt cho ngành y-dược ở nước ta.
Hình 3.35. Sắc đồ của mẫu Đan sâm ở Sapa
Tanshinone I
Cryptotanshinone
Tanshinone IIA Hypophyllanthin
Phyllanthin
90
Bảng 3.20. Hàm lƣợng (mg/g) tanshinone I, tanshinone IIA và cryptotanshinone trong các mẫu cây Đan sâm(*)
Mẫu
LC-MS/MS UPLC-DAD
Tanshinone I Tanshinone IIA Cryptotanshinone Tanshinone I Tanshinone IIA Cryptotanshinone Sa Pa 2,4613 ± 0,0007 9,1889 ± 0,0002 4,6549 ± 0,0006 2,45 ± 0,01 9,18 ± 0,03 4,65 ± 0,02 Lâm Đồng 4,4286 ± 0,0009 9,8970 ± 0,0035 8,1589 ± 0,0006 4,43 ± 0,01 9,88 ± 0,03 8,14 ± 0,02 Hà Giang 3,5345 ± 0,0011 13,0252 ± 0,0004 5,2017 ± 0,0015 3,53 ± 0,02 12,99 ± 0,06 5,19 ± 0,03 Mộc Châu 2,8852 ± 0,0009 8,3844 ± 0,0006 4,1723 ± 0,0005 2,88 ± 0,03 8,39 ± 0,05 4,16 ± 0,02 Quảng Tây 1,5559 ± 0,0013 4,7958 ± 0,0007 2,8630 ± 0,0008 1,56 ± 0,02 4,78 ± 0,03 2,85 ± 0,01 Mường Lống 1,2717 ± 0,0013 3,8278 ± 0,0003 3,8956 ± 0,0012 1,26 ± 0,02 3,81 ± 0,03 3,88 ± 0,03
(*) Các kết quả trong bảng là trung bình số học (mg/g) ± độ lệch chuẩn (mg/g);
91
Bảng 3.20 cũng cho thấy, cả 2 phương LC-MS/MS và UPLC-DAD đều cho kết quả hàm lƣợng lƣợng tanshinone I, cryptotanshinone và tanshinone IIA trong các mẫu nhƣ nhau. Điều này cũng cho phép khẳng định rằng, mặc dù đạt đƣợc độ lặp lại kém hơn, nhưng phương pháp UPLC-DAD vẫn đạt được độ đúng tốt khi so với phương pháp LC-MS/MS (nếu chấp nhận rằng, phương pháp LC-MS/MS là phương pháp chuẩn). Như vậy, ngoài phương pháp LC-MS/MS, có thể chọn phương pháp UPLC-DAD (phương pháp có chi phí thiết bị rẻ hơn) để phân tích đồng thời những tanshinone I, cryptotanshinone và tanshinone IIA trong mẫu Đan sâm và các thực phẩm chức năng, thuốc bào chế từ cây Đan sâm.
(iii) Hàm lượng eurycomanone trong cây Mật nhân:
Kết quả ở bảng 3.21 cho thấy (sắc đồ đối với Mật nhân đƣợc nêu ở hình 3.36 ) đối với cây Mật nhân hàm lƣợng eurycomanone dao động trong khoảng 0,1716 – 3,1336 mg/g khối lƣợng khô (phụ lục B10). Theo chủ quan của chúng tôi, các kết quả thu được ở đây có giá trị tham khảo tốt cho ngành y-dược ở nước ta.
Bảng 3.21. Hàm lượng (mg/g) eurycomanone trong cây Mật nhân ở các địa phương khác nhau(*)
Mẫu Vũng Tàu Đắk Nông Hòa Bình Nghệ An Bắc Giang Hà Giang
C 1,8533 ± 0,0001
0,1716 ± 0,0001
0,8015 ± 0,0001
0,2739 ± 0,0001
3,1336 ± 0,0005
0,9291 ± 0,0001
(*) Các kết quả trong bảng là trung bình số học (mg/g) ± độ lệch chuẩn (mg/g);
Hình 3.36. Sắc đồ của (a) mẫu Mật nhân ở Hà Giang; (b) mẫu Mật nhân ở Bắc Giang
Eurycomanone Eurycomanone
(a) (b)
92