3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.1.6. Xác ựịnh các chỉ tiêu hóa lý cơ bản của sản phẩm tinh dầu của
và lá mác mật
Mỗi loại tinh dầu ựược ựặc trưng bởi các chỉ số hóa lý như: tỉ khối, chỉ số khúc xạ, chỉ số axit, chỉ số esteẦViệc xác ựịnh ựược các chỉ số này sẽ cho phép ựánh giá một cách tương ựối chất lượng tinh dầu.
a. Xác ựịnh chỉ số khúc xạ theo phương pháp ựo góc giới hạn bằng khúc xạ kế kiểu Abbe
Chỉ số khúc xạ ựược xác ựịnh theo phương pháp ựo góc giới hạn bằng khúc xạ kế kiểu Abbe ở 20oC bằng cách cho dòng nước chảy qua máy ựể duy trì máy ở 20oC.
đầu tiên ựiều chỉnh máy nhằm triệt tiêu hiện tượng tán sắc ánh sáng ựể có thể thấy rõ ranh giới giữa miền sáng, tối của thị trường. Sau ựó chuẩn lại ựể thấy rõ nét vạch chuẩn chữ thập ựỏ giữa thị trường.
Mở hộp lăng kắnh, dùng bông tẩm axeton hoặc este lau kỹ lăng kắnh và thấm khô bằng vải mềm hoặc bông thấm nước.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 37
Nhỏ 2 - 3 giọt tinh dầu lên mặt lăng kắnh mờ phắa dưới và áp vào lăng kắnh bên trên. Khi nhiệt kế của khúc xạ kế chỉ 200C, nhìn vào thị kắnh, chỉnh hiện tượng tán sắc nếu có rồi từ từ xoay bộ lăng kắnh ựưa ranh giới giữa hai miền sáng và tối cắt ựúng giao ựiểm của vạch chuẩn. đọc chỉ số khúc xạ ở ngang vạch chuẩn. Xác ựịnh lại vị trắ và ựọc chỉ số ba lần. Chỉ ựọc chỉ số khúc xạ khi nhiệt ựộ ựã ổn ựịnh. Kết quả là trung bình cộng của ba giá trị ựọc ựược và làm tròn tới số thập phân thứ tư.
Khi ựo chỉ số khúc xạ của tinh dầu ở nhiệt ựộ khác và cần tắnh chuyển về chỉ số khúc xạ ở nhiệt ựộ nhất ựịnh, dùng công thức sau:
NtD = NtỖD + 0,0004* (tỖ Ờ t)
Trong ựó:
NtD: Chỉ số ựọc ựược ở nhiệt ựộ t t: Nhiệt ựộ cần tắnh chuyển; 0C
b. Xác ựịnh tỉ trọng bằng bình tỷ trọng
Tỉ trọng của tinh dầu là tỉ số của khối lượng tinh dầu ở 200C với khối lượng của cùng một thể tắch nước cất cũng ở 200C.
Bình tỉ trọng ựược rửa sạch bằng hỗn hợp sunfocromic, tráng kỹ bằng nước cất và súc lại bằng axeton hoặc etanol, làm khơ bằng cách thổi vào bình một luồng khơng khắ khơ, nóng hoặc sấy nhẹ ở 70 - 800C tới khối lượng khơng ựổi. Cân khối lượng của bình và nút chắnh xác tới 0,0002g.
Rót nhẹ nước cất vào bình cao hơn vạch mức một chút, tránh khơng tạo bọt khi rót. Ngâm bình vào mơi trường ựiều nhiệt ựã duy trì ở 20 ổ 0,50C ngập tới cổ lọ trong 30 phút tới khi nhiệt ựộ của nước trong bình ựạt 20 ổ 0,50C. Dùng các giải giấy thấm hút bớt nước trong bình tới ựúng vạch mức và thấm khô các giọt nước bám ở thành trong cổ bình, lau khơ cổ bình và ựậy nút. Lấy bình ra khỏi mơi trường ựiều nhiệt, lau khô và cân nhanh chắnh xác ựến 0,0002g. Sau ựó ựổ nước và làm khơ bình như trên.
Rót nhẹ tinh dầu vào bình chú ý khơng tạo bọt khi rót và tiến hành giống như làm với nước cất. Ta xác ựịnh ựược khối lượng của bình và tinh dầu ở 20 ổ 0,50C.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 38 m Ờ m 20 2 d20 = m Ờ m1 Trong ựó: m: Khối lượng bình tỉ trọng; (g)
m1: Khối lượng bình tỉ trọng và nước ở 200C; (g) m2: Khối lượng bình tỉ trọng và tinh dầu ở 200C; (g)
Kết quả là trung bình cộng của hai lần xác ựịnh liên tiếp có sai lệch giá trị khơng lớn hơn 0,001g và ựược làm tròn ựến số thập phân thứ tư.
c. Xác ựịnh chỉ số axit bằng phương pháp chuẩn ựộ với kiềm (KOH) Chỉ số axit là số mg kali hydroxit cần ựể trung hịa axit tự do có chứa trong 1g tinh dầu.
Nguyên tắc của phương pháp này dựa trên sự trung hịa axit tự do có trong tinh dầu bằng dung dịch kiềm chuẩn theo phản ứng:
RCOOH + KOH => RCOOK + H2O
Cân 2g tinh dầu (chắnh xác ựến 0,005) vào bình cầu xà phịng hóa. Thêm vào ựó 10ml etanol (etanol 95% thể tắch ở 200C, ựã ựược trung hòa bằng KOH 0,1N trong etanol) và vài giọt chất chỉ thị màu phenolphtalein (0,2% trong etanol). Chuẩn ựộ bằng bằng dung dịch KOH 0,1N trong etanol (chuẩn bị trước 24h) ựến khi xuất hiện màu hồng vững bền trong khoảng 30 giây. Ghi số ml KOH tiêu tốn
Chỉ số axit ựược tắnh theo cơng thức: 5, 61.V A =
m Trong ựó:
V: Lượng dung dịch KOH 0,1N ựã dùng ựể chuẩn ựộ; (ml) m: Khối lượng mẫu tinh dầu; (g)
5,61: Lượng KOH có trong 1ml dung dịch KOH 0,1N; (mg)