CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5. Phương pháp nghiên cứu
2.5.3. Phương pháp phân tích vi sinh
❖ Xác định tổng số vi sinh vật hiếu khí (TPC)
Nguyên tắc: E. Coli là dạng Coliform có nguồn gốc từ phân gây bệnh tiêu chảy, phát triển được trong điều kiện ở 44 ± 0,50C, có khả năng sinh indol, acid, không sinh acetol và không dùng Citratdium nguồn carbon. E. Coli được xác định theo khả năng lên men lactose, sinh hơi ở 44 ± 0,50C, có phản ứng IMVIC phù hợp.
Mơi trường sử dụng là môi trường tăng sinh BGBL, môi trường phân lập EBM, mơi trường thử phản ứng sinh hóa Simmons Citrate Aga.
❖ Xác định tổng số Coliforms
Tổng số Coliforms được xác định theo phương pháp đếm khuẩn lạc mọc trên đĩa petri chứa môi trường Eorine Methyline Blue (EMB) hoặc môi trường Endo.
❖ Xác định tổng số nấm men, nấm mốc
Nuôi cấy ở nhiệt độ 28 ± 10C trong thời gian 5 ngày trong môi trường Czapeck rồi tiến hành đếm khuẩn lạc.
❖ Xác định Staphylococus aureus
Nuôi cấy ở nhiệt độ 370C trong thời gian 24 - 48h trong môi trường BP (Baird parker), tiến hành nếm số khuẩn lạc đặc trưng và không đặc trưng rồi từ đó dựa vào tỷ lệ của chúng để xác định số khuẩn lạc.
❖ Xác định Streptococus faecal
Sử dụng phương pháp đếm khuẩn lạc, mẫu được cấy trên môi trường chọn lọc Enterococus agar, sau khi ủ 440C trong 48h đếm các khuẩn lạc đặc trưng và khẳng định khuẩn lạc đã đếm bằng các thử nghiệm hóa sinh. Trường hợp nghi ngờ các vi sinh vật trong mẫu bị tổn thương hay yếu do quá trình chế biến và bảo quản, tiến hành phục hồi chúng bằng cách cấy chúng vào trong môi trường không chọn lọc TSA, ủ ở nhiệt độ 370C trong 2h, sau đó phủ lên một lớp môi trường chọn lọc Enterococus agar, các đĩa môi trường sau khi cấy được ủ ở 440C trong 48h.
❖ Xác định Clostridium perfringens
Mẫu được cấy vào môi trường ISA (Iron Sulíite Agar) hay SFP (Shahidi Ferguson Perfringens) để ở 450C, lắc đều, sau khi môi trường đã đông cho thêm trên bề mặt 1 ít mơi trường ISA hay SFP. Sau đó đem ủ ở nhiệt độ 370C trong 24 - 48h trong các bình kỵ khí. Sau đó đếm tất cả các khuẩn lạc đen có trên đĩa. Để khẳng định cần thực hiện những quy trình tiêu chuẩn để giúp khẳng định kết quả.