Cú nhiều mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu, trong nghiờn cứu này đó dựa trờn phương phỏp của David.K [70] và tham khảo cỏc mụ hỡnh của cỏc tỏc giả
khỏc [50], [83], [101], [105], [120]...
Động vật được dựng trong thớ nghiệm là chuột cống trắng cú trọng lượng tương đương nhau, chia làm 5 nhúm, đõy cũng là loài động vật mà cỏc tỏc giả khỏc thường dựng để nghiờn cứu về cỏc mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu trờn thực nghiệm.
Động vật thớ nghiệm được dựng thuốc theo đường uống qua ống thụng dạ dày vỡ theo đường này ta cú thể đưa chớnh xỏc lượng thuốc cần nghiờn cứu vào cơ thể động vật. Trong khi nhiều tỏc giả cho động vật thớ nghiệm dựng thuốc bằng cỏch trộn vào thức ăn, sẽ khụng chớnh xỏc vỡ động vật thực nghiệm cú thể khụng ăn hết thức ăn cú chứa thuốc.
Về thời gian và liều cholesterol dựng trong cỏc thớ nghiệm của cỏc tỏc giả
cũng khỏc nhau: Han LK. cho chuột nhắt ăn thức ăn chứa 1% cholesterol trong 9 tuần [83]; cũn Cynthia M. cho chuột cống đực ăn 0,125g cholesterol/100g thức
ăn trong 18 ngày [67]. Nhiều tỏc giả khỏc đó nghiờn cứu mụ hỡnh gõy tăng lipid trờn chuột cống trắng bằng cỏch cho chuột cống ăn thức ăn cú chứa 1% cholesterol: trong 2 tuần (theo Jennings C.D.) [89], trong 6 tuần ( theo LeHoux J.) [98], trong 4 tuần (theo Son CG) [119]; và Macchi G đó cho chuột cống ăn thức ăn cú chứa 0,5% cholesterol trong 16 tuần [105]...
Qua quỏ trỡnh thăm dũ thớ nghiệm nhiều lần, chỳng tụi đó gõy tăng lipid mỏu bằng cỏch cho chuột uống cholesterol với liều 0,5g/kg/24h trong thời gian 6 tuần (42 ngày) liờn tục (phương phỏp của David. K.) [70]:
Nghiờn cứu thực nghiệm đó sử dụng 45 chuột cống trắng, chia làm 5 nhúm. Cõn nặng trung bỡnh của cỏc nhúm chuột tại từng thời điểm lấy mỏu
đều khỏc biệt khụng cú ý nghĩa thống kờ, điều này chứng tỏ việc nuụi dưỡng chuột đảm bảo sự tăng trưởng đều giữa cỏc nhúm và việc uống cholesterol, cũng như uống nấm Hồng chi, uống Lipanthyl khụng ảnh hưởng đến tăng trưởng của chuột trong thời gian thực nghiệm.
Kết quả nghiờn cứu đó cho thấy (bảng 3.16): Chuột uống cholesterol liều 0,5g/kg /24h trong thời gian 6 tuần (42 ngày) liờn tục đó gõy nờn rối loạn lipid mỏu, thể hiện thụng qua sự biến đổi cỏc chỉ số CT, TG, HDL-C, LDL-C huyết tương của nhúm 2: cỏc chỉ số lipid mỏu (cholesterol toàn phần, triglycerid, LDL-C) ở chuột uống cholesterol đều tăng lờn cú ý nghĩa so với nhúm chứng chỉ uống dầu lạc khụng cú cholesterol (p < 0,05 – 0,001); đặc biệt là chỉ số LDL-C ở nhúm uống cholesterol đó tăng lờn gấp 5 lần so với nhúm chứng (2,49 mmol so với 0,48 mmol); chỉ số HDL-C ở nhúm chuột uống cholesterol giảm cũn 77,36% so với nhúm chứng (p < 0.05). Như vậy cholesterol liều 0,5g/kg cho chuột uống trong 6 tuần đó tạo được mụ hỡnh tăng lipid mỏu.
Kết quả này cũn cho thấy cú thể ỏp dụng mụ hỡnh của David.K trờn chuột cống trắng Việt Nam để gõy tăng lipid mỏu theo cơ chế ngoại sinh. Mụ hỡnh gõy tăng lipid của chỳng tụi đó làm tăng LDL-C gấp 5 lần trong khi mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu của Nguyễn Thị Mai Anh và Đào Văn Phan cũng với liều uống cholesterol như nhau nhưng chỉ làm tăng LDL-C lờn 2 lần (sau 4 tuần) [2].
4.2.2. Ảnh hưởng của nấm Hồng chi đối với hàm lượng cholesterol huyết thanh chuột cống trắng:
* Qua quỏ trỡnh: thử độc tớnh cấp, độc tớnh bỏn trường diễn, đỏnh giỏ
ảnh hưởng của thuốc nghiờn cứu trờn mụ hinh gõy tăng lipid mỏu trờn chuột cống trắng, qua nhiều lần thăm dũ trờn thớ nghiệm đó chọn ra 2 liều nấm Hồng chi sử dụng trờn thực nghiệm là 4g/kg/24giờ và 12g/kg/24giờ (tương đương
với liều cho người và gấp ba lần liều thường dựng cho người theo kinh nghiệm dõn gian) [16].
Sau 6 tuần thớ nghiệm, kết quả ở bảng 3.17, bảng 3.18, bảng 3.19, bảng 3.20 đó cho thấy: nấm Hồng chi Đà Lạt 4g/kg/24giờ cú tỏc dụng hạn chế rừ rệt sự
rối loạn cả 4 chỉ số lipid mỏu so với lụ 2 gõy tăng lipid mỏu (p4-2 < 0,05 - 0,01): - NHC 4g/kg/24giờ cú tỏc dụng làm giảm CT 27,41%, giảm TG 24,82%, giảm LDL-C 54,32% tương đương với Cholestyramin với liều 1,6g/kg (p4-3 > 0,05).
* Nấm Hồng chi với liều 4g/kg/24giờ cú tỏc dụng làm giảm cỏc chỉ số
lipid mỏu rừ rệt so với nhúm chuột gõy tăng lipid mỏu khụng điều trị (p4-2 < 0,05 - 0,01).
- Riờng tỏc dụng trờn HDL-C thỡ NHC 4g/kg/24giờ làm tăng cao hơn hẳn lụ chuột dựng Cholestyramin p4-3 < 0,05 (53,34% so với 28,04%).
- Nấm Hồng chi liều 12g/kg/24giờ cú tỏc dụng hạn chế sự rối loạn cả 4 chỉ số lipid mỏu: đó làm giảm CT 26,15%, giảm TG 23,36%, giảm LDL-C 54,82%; mức độ hạn chế sự rối loạn lipid mỏu này khụng khỏc biệt so với nhúm chuột dựng NHC 4g/kg/24giờ (p5-4>0,05). Kết quả nghiờn cứu cũn cho thấy liều NHC cao hơn (liều 12g/kg/24giờ) cũng khụng làm giảm cỏc chỉ số
lipid mỏu nhiều hơn lụ dựng NHC liều 4g/kg/24giờ (p5-4 > 0,05). Điều này chứng tỏ 4g/kg/24giờ là liều “trần” gõy ra tỏc dụng “trần” của nấm Hồng chi
Đà Lạt, liều cao hơn cũng khụng cú tỏc dụng hơn. Trong nghiờn cứu trước đú chỳng tụi đó thử độc tớnh bỏn trường diễn với liều 2g/kg/24giờ, 10g/kg/24giờ
trờn thỏ thuốc vẫn khụng cú độc. Như vậy liều “trần” 4g/kg/24 giờ nằm trong khoảng phạm vi an toàn rộng của nấm Hồng chi Đà Lạt khi thử độc tớnh bỏn trường diễn.
* Trong thớ nghiệm chỳng tụi sử dụng Cholestyramin là một thuốc kinh
điển hiện đang được sử dụng trờn thực nghiệm và trong lõm sàng để điều trị
rối loạn lipid mỏu [37], [45], [101]; đõy là một thuốc thuộc nhúm thuốc làm giảm hấp thu và tăng thải trừ lipid. Cholestyramin là nhựa trao đổi anion [37], [45], [81]. Cỏc nhựa này mang điện tớch dương sẽ gắn vào cỏc acid mật mang
điện tớch õm làm tăng bộc lộ cỏc thụ thể LDL ở mặt tế bào gan để tăng cường thu nạp LDL-C từ huyết tương và làm tăng hoạt tớnh của HMG-CoA reductase, là enzym kiểm soỏt tổng hợp cholesterol. Số lượng LDL receptor ở
gan tăng làm tăng việc gắn LDL-C từ huyết tương nờn làm hạ cholesterol huyết tương. Cholestyramin với liều 1,6g/kg/24giờ đó làm giảm rừ rệt CT 34,3%; TG 26,28%; LDL-C 56,63%; đồng thời làm tăng HDL-C 28,04% so với nhúm chuột gõy tăng lipid mỏu khụng điều trị (p3-2 < 0,05-0,01) [6], [81].
Mụ hỡnh thực nghiệm tăng cholesterol trờn chuột cống bằng cho uống cholesterol thường dựng cho thử cỏc thuốc cú ảnh hưởng làm giảm hấp thu và tăng thải trừ cholesterol, ớt cú tỏc dụng đỏnh giỏ sự ức chế sinh tổng hợp cholesterol [6], [81].
Hiện nay cú nhiều thuốc khỏc nhau đó và đang được sử dụng điều trị
rối loạn lipid mỏu như Cholestyramin, Lipanthyl, Simvastatin, Pravastatin... Tất cả cỏc thuốc này được xếp thành hai nhúm: Thuốc ảnh hưởng đến hấp thu và thải trừ lipid và nhúm thuốc ảnh hưởng đến sinh tổng hợp lipid [6], [37],
[81]. Thực nghiệm này chỉ mới cho thấy nấm Hồng chi Đà Lạt cú tỏc dụng hạ
lipid mỏu theo cơ chế ngoại sinh, NHC đó cú tỏc dụng ức chế quỏ trỡnh hấp thu và tăng thải trừ tớch cực cholesterol. Như vậy cần cú những đỏnh giỏ thờm tiếp theo về nấm Hồng chi.
4.3. TÁC DỤNG CỦA NẤM HỒNG CHI ĐÀ LẠT TRONG ĐIỀU TRỊ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN LIPID MÁU Ở NGƯỜI THễNG QUA MỘT SỐ CHỈ SỐ LÂM SÀNG VÀ CẬN LÂM SÀNG
4.3.1. Mối tương quan giữa cỏc yếu tố liờn quan với cỏc chỉ số lipid:
- Kết quả nghiờn cứu cho thấy: bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu thường cú thúi quen: lười vận động, thớch ăn ngọt, thớch ăn mỡ, hỳt thuốc lỏ, dư cõn và bộo phỡ (biểu đồ 3.2 và bảng 3.24). Nghiờn cứu này cũng phự hợp với nghiờn cứu của cỏc tỏc giả nước ngoài về sự tồn tại đồng thời của cỏc yếu tố nguy cơ. Nghiờn cứu của San Antonio thấy cú tỡnh trạng phối hợp giữa bộo phỡ, đỏi thỏo
đường týp 2, tỡnh trạng suy giảm dung nạp glucose với tăng cholesterol và tăng triglycerid mỏu.
4.3.2. Sự liờn quan giữa cỏc biến lipid và huyết ỏp:
Bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú tăng huyết ỏp chiếm 61,45% (bảng 3.28). Nghiờn cứu này cũng phự hợp với nghiờn cứu của cỏc tỏc giả trong nước: Trương Thanh Hương và Phạm Gia Khải đó nghiờn cứu về sự biến đổi một số thành phần lipid mỏu trong 362 người bị tăng huyết ỏp cú 284 bệnh nhõn bị rối loạn lipid mỏu (chiếm 78,5%) [27]. Kết quả nghiờn cứu cũng phự hợp với nghiờn cứu của Giovanni de Simone tại Mỹ với nghiờn cứu Hypergel
trờn 2096 bệnh nhõn THA và 393 người cú HA bỡnh thường; nghiờn cứu này
đó cho biết: tỉ lệ bộo phỡ, tăng CT mỏu, bệnh tim mạch ở những bệnh nhõn cú THA cao hơn ở nhúm người cú HA bỡnh thường với p < 0,0001 [118]. Nghiờn cứu của Lindenstrom E, của Zanchetti A. cũng thấy cú sự tồn tại đồng thời của tăng huyết ỏp, tăng cholesterol và tăng triglycerid mỏu [103], [133].
* Ở những bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú tăng huyết ỏp (bảng 3.28) trị
số trung bỡnh của CT, TG, LDL-C, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C đều cú xu hướng cao hơn và đồng thời HDL-C lại cú xu hướng thấp hơn bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú huyết ỏp bỡnh thường (p > 0,05). Khi nghiờn cứu về sự liờn quan giữa cỏc chỉ số lipid này với huyết ỏp cỏc tỏc giả nước ngoài cũng đó cú những nhận xột tương tự:
- Yu - An Ding và cộng sự ởĐài Loan [132] nghiờn cứu chức năng tiểu cầu và cỏc biến lipid mỏu trờn 71 bệnh nhõn THA cú so sỏnh với nhúm chứng gốm 37 người cũng đó đỏnh giỏ: tỉ lệ CT, TG và LDL-C ở nhúm THA cao hơn ở nhúm chứng khụng cú THA.
- David Ashton và cộng sự tại Anh [52] nghiờn cứu sư liờn quan giữa THA và rối loạn lipid mỏu ở 14077 phụ nữ từ 30 - 60 tuổi. Sau nghiờn cứu cỏc tỏc giả cũng đó nhận thấy rằng: trị số trung bỡnh của CT, TG, CT/HDL-C, LDL-C ở nhúm cú THA cao hơn ở nhúm cú HA bỡnh thường và trị số HDL-C thỡ lại thấp hơn (p < 0,0001).
- Stephen W. Macmahon và cộng sự [106] nghiờn cứu rối loạn lipid mỏu
THA khụng điều trị và nhúm THA cú điều trị). Cỏc tỏc giả này cũng đó đưa ra nhận xột: ở nhúm bệnh nhõn cú THA thỡ tỉ lệ CT, CT/HDL-C cao hơn ở nhúm cú huyết ỏp bỡnh thường.
Như vậy, kết quả nghiờn cứu đó cho thấy: ở những bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú tăng huyết ỏp, do cú lượng cholesterol cao hơn nờn HDL-C đó tăng cường hoạt động để vận chuyển ngược lượng cholesterol dư thừa ở cỏc tế
bào “trở về” gan để tiếp tục chuyển hoỏ và đào thải ra ngoài; vỡ vậy lượng HDL-C bị giảm đi so với những bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu khụng cú tăng huyết ỏp (cú lượng cholesterol thấp hơn).
4.3.3. Sự thay đổi triệu chứng cơ năng theo tứ chẩn:
Theo YHCT: do ớt vận động thể lực; ẩm thực bất điều: ăn nhiều thức ăn ngọt bộo, nhiều cao lương mĩ vị; uống nhiều rượu, làm việc trớ úc quỏ sức, làm tổn thương tỳ vị, dẫn đến đàm thấp nội sinh. Do tiờn thiờn bất tỳc (yếu tố thể
chất): làm cho thận khớ bất tỳc, thận dương hư khụng ụn ấm được tỳ dương, tỳ
khụng vận húa được thủy thấp, mà sinh đàm ẩm, đàm thấp... [7], [33].
Qua tứ chẩn: vọng, văn, vấn, thiết (bảng 3.29, bảng 3.30, bảng 3.31 và bảng 3.32) trờn bệnh nhõn cú chứng đàm thấp đó cho thấy: biểu hiện mạch hoạt và mạch huyền hoạt là triệu chứng đỏng tin cậy nhất của bệnh này (chiếm 100%). Mạch hoạt là mạch của chứng bệnh đàm thấp (rối loạn lipid mỏu đơn thuần); cũn mạch huyền hoạt là cỏc trường hợp đàm thấp cú biểu hiện huyễn vựng kốm theo (rối loạn lipid mỏu cú THA). Lưỡi rờu trắng nhờn,
bệu nhớt, cú ngấn răng (chiếm tỉ lệ 69,79%) và khỏt nhưng khụng muốn uống cũng là những biểu hiện của chứng bệnh đàm thấp.
Cỏc triệu chứng khỏc như:
- Đau đầu, hoa mắt là biểu hiện của huyễn vựng (tăng huyết ỏp) trờn bệnh nhõn đàm thấp (rối loạn lipid mỏu) .
- Hỡnh thể mập; cử động chậm chạp, nặng nề tương ứng với cỏc bệnh nhõn dư cõn và bộo phỡ của y học hiện đại.
- Một số triệu chứng: đau lưng, mỏi gối, ự tai, tiểu đờm là biểu hiện của cỏc trường hợp rối loạn lipid mỏu ở người cao tuổi thể đàm thấp cú biểu hiện can thận hư; Mệt mỏi, tứ chi ró rời, đầy trướng bụng, ăn kộm, cơ nhục nhẽo là biểu hiện của tỳ hư.
- Tiếng núi nhỏ, yếu hơn so với lỳc chưa bị bệnh là biểu hiện của hư
chứng; tiếng núi bỡnh thường và núi to rừ ràng là biểu hiện của thực chứng. Sau điều trị 40 ngày, kết quả nghiờn cứu đó cho thấy: ở cả hai nhúm uống nấm Hồng chi và Lipanthyl đều cú tỏc dụng làm giảm cỏc triệu chứng lõm sàng liờn quan đến chứng đàm thấp của YHCT: mạch của bệnh nhõn hầu hết đó trở về bỡnh thường (mạch nhu hoón). Lưỡi: rờu hết trắng nhờn; và mức độ bệu nhớt cú ngấn răng giảm; đỡ mập hoặc hết mập; cửđộng đỡ chậm chạp, đỡ nặng nề hơn; hết hoặc giảm cỏc triệu chứng: tờ nặng chõn tay, tờ nặng thõn mỡnh, dị
cảm đầu chi; hết cỏc biểu hiện đau đầu và hoa mắt.
Kết quả (bảng 3.29, 3.30, 3.31, 3.32) cũn cho thấy: nhiều bệnh nhõn Y học hiện đại chẩn đoỏn bị rối loạn lipid mỏu nhưng trờn lõm sàng ngoài biểu
hiện mạch hoạt; cũn cú tới: 29 bệnh nhõn lưỡi khụng nhờn, khụng nhớt, chất lưỡi khụng bệu; 85 bệnh nhõn khụng cú biểu hiện khỏt mà khụng muốn uống; 40 bệnh nhõn khụng cú biểu hiện tờ nặng chõn tay, thõn mỡnh... Điều này đó khẳng định phương phỏp kết hợp giữa YHCT và YHHĐ là hoàn toàn cần thiết trong việc phũng và chữa bệnh này; thước đo để chẩn đoỏn và tiờn lượng rối loạn lipid mỏu phải dựa vào việc xột nghiệm cỏc chỉ số lipid mỏu.
4.3.4. Tỏc dụng hạ lipid mỏu của nấm Hồng chi Đà Lạt (Ganoderma
lucidum) chủng DL1:
* Vữa xơ động mạch và bệnh mạch vành là hậu quả của nhiều nguyờn nhõn, nhưng qua nghiờn cứu về dịch tễ và lõm sàng cho thấy CT mỏu cao là nguyờn nhõn chớnh gõy ra cỏc bệnh này; việc làm giảm CT mỏu cú tỏc dụng làm giảm tỉ lệ mắc và tử vong của bệnh này [114]. Nhiều tỏc giả đó nghiờn cứu cho thấy: nồng độ cholesterol mỏu càng cao thỡ nguy cơ mắc bệnh mạch vành càng lớn [14], [62], [130]. Nghiờn cứu Frammingharn trờn 5000 bệnh nhõn, theo dừi trong 14 năm thấy cú mối tương quan thuận giữa nguy cơ bệnh mạch vành và nồng độ cholesterol mỏu [93]. Nghiờn cứu của Kannel và cộng sự đó cho thấy: khi CT tăng trờn 2,5 g/l thỡ nguy cơ BMV tăng 2,25 - 3,25 lần, Khi CT từ 5,2 - 6,5 mmol/l thỡ tử vong do BMV tăng gấp đụi, CT từ 5,2 - 7,8 mmol/l thỡ tử vong do BMV tăng gấp bốn lần [13], [53], [55], [113]. Chớnh vỡ vậy nờn đó cú nhiều cụng trỡnh nghiờn cứu để làm giảm cholesterol mỏu nhằm phũng và chống cỏc bệnh này:
- Nghiờn cứu LRC (Lipid Research Clinic Coronary Primary Prevention Trial, 1984) trờn 3806 nam giới theo dừi trong 7 - 10 năm đó cho thấy: nếu
làm giảm được 1% cholesterol thỡ giảm được 2% nguy cơ bệnh mạch vành, nếu làm giảm được 20% cholesterol thỡ giảm được 40% nguy cơ này, với cholesterol >1,8 g/l thỡ cứ tăng 0,1g sẽ tăng 5% tử vong chung và 9% tử vong do tim mạch. Gould và cs (l995), phõn tớch 35 nghiờn cứu trờn 77.257 bệnh nhõn, theo dừi trong 2 - 12 năm, thấy cứ giảm 10% cholesterol thỡ giảm được l0% tử vong chung và 13% tử vong do bệnh mạch vành [13], [14].
- Kết quả nghiờn cứu (bảng 3.39) đó cho thấy: nấm Hồng chi Đà Lạt với liều 4g/24giờ và 15g/24giờ sau 40 ngày điều trị đó làm giảm rừ rệt cholesterol toàn phần với p < 0,05 (13,63% và 22,09%); mức độ giảm CT ở liều nấm Hồng chi 15g/24giờ cao hơn liều 4g/24giờ (p < 0,05); tỏc dụng làm giảm CT của nấm Hồng chi 15g/24giờ tương đương với Lipanthyl 200 mg/24giờ sau 40 ngày điều trị với p > 0,05 (22,09% và 21,26%).