LD50 là một chỉ tiờu quan trọng để đỏnh giỏ tớnh an toàn của một chế phẩm [16], [127]. Trong nghiờn cứu này đó tiến hành xỏc định LD50
uống với nồng độ tối đa và thể tớch tối đa mà chuột cú thể chịu đựng được là 402g/kg thõn trọng, chuột vẫn khụng chết; vỡ vậy, đó khụng thể xỏc
định được liều chết 50% (LD50) của thuốc thử trờn chuột nhắt trắng theo
đường uống.
Núi một cỏch khỏc, chuột nhắt uống với liều gấp 500 lần liều lõm sàng cho người (theo kinh nghiệm dõn gian) cũng khụng thấy độc tớnh cấp.
4.1.2. Kết quả nghiờn cứu độc tớnh bỏn cấp:
Độc tớnh bỏn cấp được tiến hành trờn thỏ trưởng thành, khỏe mạnh. Kết quả nghiờn cứu cho thấy: nấm Hồng chi Đà Lạt chủng DL1 cú độ an toàn cao, thể hiện qua một số chỉ tiờu sau:
* Ảnh hưởng của nấm Hồng chi đối với trọng lượng cơ thể thỏ (TLCT):
Trọng lượng cơ thể thỏ của 2 lụ uống nấm Hồng chi Đà Lạt chủng DL1 và lụ chứng sinh học tại cỏc thời điểm thay đổi khụng cú ý nghĩa thống kờ với p > 0,05 (bảng 3.2). Sau 30 ngày thớ nghiệm trọng lượng cơ thể thỏ ở 3 lụ thớ nghiệm tại cỏc thời điểm đều tăng cú ý nghĩa thống kờ (p < 0,05). Điều này chứng tỏ khi thỏ uống nấm Hồng chi Đà Lạt chủng DL1 với liều uống 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24giờ (tương đương với liều lõm sàng và gấp 5 lần liều lõm sàng trờn người theo kinh nghiệm dõn gian), uống liờn tục trong 30 ngày đó khụng làm ảnh hưởng đến sự phỏt triển bỡnh thường của thỏ.
* Ảnh hưởng của nấm Hồng chi đến hệ thống tạo mỏu của thỏ:
Sau 30 ngày liờn tục uống nấm Hồng chi Đà Lạt chủng DL1 với liều 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24giờ khụng thấy tổn thương hệ tạo mỏu (bảng 3.3, bảng 3.4, bảng 3.5, bảng 3.6, bảng 3.7, bảng 3.8, và bảng 3.9):
- Với liều cao gấp 5 lần liều dựng trờn lõm sàng (10g/kg/24giờ) nấm Hồng chi Đà Lạt cũng khụng làm thay đổi số lượng hồng cầu, bạch cầu, thể
tớch trung bỡnh hồng cầự, huyết sắc tố, hematocrit, tiểu cầu (HC, BC, MCV, Hb, TC) của cỏc lụ thỏ tại thời điểm xột nghiệm sau 30 ngày uống thuốc p > 0,05. Điều đú chứng tỏ thuốc khụng cú ảnh hưởng đến chức năng tạo mỏu thỏ. Kết quả này cũng được khẳng định thờm trờn lõm sàng với người dựng liều 4g/24giờ và 15g/24giờ liờn tục trong 40 ngày cũng khụng thấy thay đổi cỏc chỉ số mỏu so với trước dựng thuốc.
- Mặt khỏc, khi quan sỏt đại thể lỏch thỏ bằng mắt thường và quan sỏt dưới kớnh lỳp cú độ phúng đại 25 lần khụng thấy cú sự khỏc nhau về màu sắc, hỡnh thỏi. Cấu trỳc vi thể của lỏch ở hai lụ uống nấm Hồng chi Đà Lạt so với lụ chứng sinh học thấy hoàn toàn bỡnh thường.
* Ảnh hưởng của nấm Hồng chi đối với hỡnh thỏi chức năng gan thỏ:
- Định lượng hoạt độ enzym AST, ALT, albumin, bilirubin toàn phần sau 30 ngày liờn tục uống nấm Hồng chi ở cả hai liều 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24giờ đều bỡnh thường (bảng 3.10, bảng 3.11, bảng 3.12, bảng 3.13).
- Sau 30 ngày liờn tục uống nấm Hồng chi với liều gấp 5 lần liều dựng trờn người theo kinh nghiệm dõn gian (10g/kg/24giờ), thuốc đó khụng làm thay đổi đỏng kể cỏc enzym gan (ALT, AST) trong huyết thanh thỏ thớ nghiệm sau 40 ngày uống thuốc liờn tục. Kết quả này đó cho thấy chức năng gan khụng bịảnh hưởng.
Riờng hỡnh ảnh vi thể gan ở lụ uống nấm Hồng chi Đà Lạt với liều 2g/kg/24giờ: trờn một số thỏ thấy cú một vài thay đổi về vi thể của gan như
tĩnh mạch trung tõm và xoang mạch xung huyết nhẹ (tiờu bản hỡnh 3.2 và 3.3); và nhu mụ gan cú một vài nang chứa thanh dịch ở liều NHC 10g/kg/24giờ (tiờu bản hỡnh 3.4); nhưng sau 15 ngày ngừng uống thuốc, cỏc tổn thương này đều hoàn toàn bỡnh phục (tiờu bản hỡnh 3.8 và tiờu bản hỡnh 3.9). Từ những điều này, đó cho thấy nấm Hồng chi Đà Lạt với liều uống 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24giờ (tương đương với liều cho người và gấp 5 lần liều thường dựng cho người) đó khụng gõy tổn thương gan; nấm Hồng chi Đà Lạt với 2 liều trờn đó khụng gõy độc cho gan.
* Ảnh hưởng của nấm Hồng chi đối với hỡnh thỏi chức năng thận thỏ:
- Định lượng ure, creatinin sau 30 ngày liờn tục uống nấm Hồng chi ở
cả hai liều 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24giờ đều trong giới hạn bỡnh thường (bảng 3.14 và bảng 3.15).
- Hỡnh ảnh vi thể của thận thỏ ở lụ uống nấm Hồng chi Đà Lạt với liều 2g/kg/24giờ trong 30 ngày liờn tục so với lụ chứng sinh học là hoàn toàn bỡnh thường . Riờng lụ uống nấm Hồng chi Đà Lạt với liều 10g/kg/24giờ, trờn một số thỏ cú thấy một vài thay đổi về vi thể của thận như: cỏc bú mạch Malpigi thoỏi húa, teo giảm thể tớch (tiờu bản hỡnh 3.7); nhưng sau 15 ngày ngừng uống thuốc, cỏc tổn thương loại này đều hoàn toàn bỡnh phục (tiờu bản hỡnh 3.10 và tiờu bản hỡnh 3.11). Điều này, chứng tỏ: nấm Hồng chi Đà Lạt với liều uống 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24giờ (liều gấp 5 lần liều lõm sàng) đó
khụng thấy tổn thương thận; nấm Hồng chi Đà Lạt với 2 liều trờn đó khụng gõy độc cho thận.
Như vậy qua nghiờn cứu độc tớnh bỏn trường diễn đó cho thấy: Thỏ
uống thuốc liờn tục trong 30 ngày với cỏc liều nấm Hồng chi 2g/kg/24giờ và 10g/kg/24 giờ (tương đương với liều cho người và gấp 5 lần liều thường dựng cho người) cũng khụng gõy thay đổi cú ý nghĩa về tỡnh trạng chung, về cỏc chức phận sinh húa của gan, thận và về chức phận tạo mỏu. Tuy nhiờn, vẫn cú thỏ thấy một vài thay đổi về vi thể của gan như tĩnh mạch trung tõm và xoang mạch xung huyết nhẹ, nhu mụ gan cú một vài nang chứa thanh dịch và thận như cỏc bú mạch Malpigi thoỏi húa, teo giảm thể tớch. Sau 15 ngày ngừng uống thuốc, cỏc tổn thương loại này đều hoàn toàn bỡnh phục.
4.2. TÁC DỤNG CỦA NẤM HỒNG CHI ĐÀ LẠT (GANODERMA LUCIDUM) CHỦNG DL1 TRấN Mễ HèNH GÂY TĂNG CHOLESTEROL MÁU THỰC NGHIỆM
4.2.1. Nghiờn cứu ổn định mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu trờn chuột cống trắng:
Cú nhiều mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu, trong nghiờn cứu này đó dựa trờn phương phỏp của David.K [70] và tham khảo cỏc mụ hỡnh của cỏc tỏc giả
khỏc [50], [83], [101], [105], [120]...
Động vật được dựng trong thớ nghiệm là chuột cống trắng cú trọng lượng tương đương nhau, chia làm 5 nhúm, đõy cũng là loài động vật mà cỏc tỏc giả khỏc thường dựng để nghiờn cứu về cỏc mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu trờn thực nghiệm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Động vật thớ nghiệm được dựng thuốc theo đường uống qua ống thụng dạ dày vỡ theo đường này ta cú thể đưa chớnh xỏc lượng thuốc cần nghiờn cứu vào cơ thể động vật. Trong khi nhiều tỏc giả cho động vật thớ nghiệm dựng thuốc bằng cỏch trộn vào thức ăn, sẽ khụng chớnh xỏc vỡ động vật thực nghiệm cú thể khụng ăn hết thức ăn cú chứa thuốc.
Về thời gian và liều cholesterol dựng trong cỏc thớ nghiệm của cỏc tỏc giả
cũng khỏc nhau: Han LK. cho chuột nhắt ăn thức ăn chứa 1% cholesterol trong 9 tuần [83]; cũn Cynthia M. cho chuột cống đực ăn 0,125g cholesterol/100g thức
ăn trong 18 ngày [67]. Nhiều tỏc giả khỏc đó nghiờn cứu mụ hỡnh gõy tăng lipid trờn chuột cống trắng bằng cỏch cho chuột cống ăn thức ăn cú chứa 1% cholesterol: trong 2 tuần (theo Jennings C.D.) [89], trong 6 tuần ( theo LeHoux J.) [98], trong 4 tuần (theo Son CG) [119]; và Macchi G đó cho chuột cống ăn thức ăn cú chứa 0,5% cholesterol trong 16 tuần [105]...
Qua quỏ trỡnh thăm dũ thớ nghiệm nhiều lần, chỳng tụi đó gõy tăng lipid mỏu bằng cỏch cho chuột uống cholesterol với liều 0,5g/kg/24h trong thời gian 6 tuần (42 ngày) liờn tục (phương phỏp của David. K.) [70]:
Nghiờn cứu thực nghiệm đó sử dụng 45 chuột cống trắng, chia làm 5 nhúm. Cõn nặng trung bỡnh của cỏc nhúm chuột tại từng thời điểm lấy mỏu
đều khỏc biệt khụng cú ý nghĩa thống kờ, điều này chứng tỏ việc nuụi dưỡng chuột đảm bảo sự tăng trưởng đều giữa cỏc nhúm và việc uống cholesterol, cũng như uống nấm Hồng chi, uống Lipanthyl khụng ảnh hưởng đến tăng trưởng của chuột trong thời gian thực nghiệm.
Kết quả nghiờn cứu đó cho thấy (bảng 3.16): Chuột uống cholesterol liều 0,5g/kg /24h trong thời gian 6 tuần (42 ngày) liờn tục đó gõy nờn rối loạn lipid mỏu, thể hiện thụng qua sự biến đổi cỏc chỉ số CT, TG, HDL-C, LDL-C huyết tương của nhúm 2: cỏc chỉ số lipid mỏu (cholesterol toàn phần, triglycerid, LDL-C) ở chuột uống cholesterol đều tăng lờn cú ý nghĩa so với nhúm chứng chỉ uống dầu lạc khụng cú cholesterol (p < 0,05 – 0,001); đặc biệt là chỉ số LDL-C ở nhúm uống cholesterol đó tăng lờn gấp 5 lần so với nhúm chứng (2,49 mmol so với 0,48 mmol); chỉ số HDL-C ở nhúm chuột uống cholesterol giảm cũn 77,36% so với nhúm chứng (p < 0.05). Như vậy cholesterol liều 0,5g/kg cho chuột uống trong 6 tuần đó tạo được mụ hỡnh tăng lipid mỏu.
Kết quả này cũn cho thấy cú thể ỏp dụng mụ hỡnh của David.K trờn chuột cống trắng Việt Nam để gõy tăng lipid mỏu theo cơ chế ngoại sinh. Mụ hỡnh gõy tăng lipid của chỳng tụi đó làm tăng LDL-C gấp 5 lần trong khi mụ hỡnh gõy tăng lipid mỏu của Nguyễn Thị Mai Anh và Đào Văn Phan cũng với liều uống cholesterol như nhau nhưng chỉ làm tăng LDL-C lờn 2 lần (sau 4 tuần) [2].
4.2.2. Ảnh hưởng của nấm Hồng chi đối với hàm lượng cholesterol huyết thanh chuột cống trắng:
* Qua quỏ trỡnh: thử độc tớnh cấp, độc tớnh bỏn trường diễn, đỏnh giỏ
ảnh hưởng của thuốc nghiờn cứu trờn mụ hinh gõy tăng lipid mỏu trờn chuột cống trắng, qua nhiều lần thăm dũ trờn thớ nghiệm đó chọn ra 2 liều nấm Hồng chi sử dụng trờn thực nghiệm là 4g/kg/24giờ và 12g/kg/24giờ (tương đương
với liều cho người và gấp ba lần liều thường dựng cho người theo kinh nghiệm dõn gian) [16].
Sau 6 tuần thớ nghiệm, kết quả ở bảng 3.17, bảng 3.18, bảng 3.19, bảng 3.20 đó cho thấy: nấm Hồng chi Đà Lạt 4g/kg/24giờ cú tỏc dụng hạn chế rừ rệt sự
rối loạn cả 4 chỉ số lipid mỏu so với lụ 2 gõy tăng lipid mỏu (p4-2 < 0,05 - 0,01): - NHC 4g/kg/24giờ cú tỏc dụng làm giảm CT 27,41%, giảm TG 24,82%, giảm LDL-C 54,32% tương đương với Cholestyramin với liều 1,6g/kg (p4-3 > 0,05).
* Nấm Hồng chi với liều 4g/kg/24giờ cú tỏc dụng làm giảm cỏc chỉ số
lipid mỏu rừ rệt so với nhúm chuột gõy tăng lipid mỏu khụng điều trị (p4-2 < 0,05 - 0,01).
- Riờng tỏc dụng trờn HDL-C thỡ NHC 4g/kg/24giờ làm tăng cao hơn hẳn lụ chuột dựng Cholestyramin p4-3 < 0,05 (53,34% so với 28,04%).
- Nấm Hồng chi liều 12g/kg/24giờ cú tỏc dụng hạn chế sự rối loạn cả 4 chỉ số lipid mỏu: đó làm giảm CT 26,15%, giảm TG 23,36%, giảm LDL-C 54,82%; mức độ hạn chế sự rối loạn lipid mỏu này khụng khỏc biệt so với nhúm chuột dựng NHC 4g/kg/24giờ (p5-4>0,05). Kết quả nghiờn cứu cũn cho thấy liều NHC cao hơn (liều 12g/kg/24giờ) cũng khụng làm giảm cỏc chỉ số
lipid mỏu nhiều hơn lụ dựng NHC liều 4g/kg/24giờ (p5-4 > 0,05). Điều này chứng tỏ 4g/kg/24giờ là liều “trần” gõy ra tỏc dụng “trần” của nấm Hồng chi
Đà Lạt, liều cao hơn cũng khụng cú tỏc dụng hơn. Trong nghiờn cứu trước đú chỳng tụi đó thử độc tớnh bỏn trường diễn với liều 2g/kg/24giờ, 10g/kg/24giờ
trờn thỏ thuốc vẫn khụng cú độc. Như vậy liều “trần” 4g/kg/24 giờ nằm trong khoảng phạm vi an toàn rộng của nấm Hồng chi Đà Lạt khi thử độc tớnh bỏn trường diễn.
* Trong thớ nghiệm chỳng tụi sử dụng Cholestyramin là một thuốc kinh
điển hiện đang được sử dụng trờn thực nghiệm và trong lõm sàng để điều trị
rối loạn lipid mỏu [37], [45], [101]; đõy là một thuốc thuộc nhúm thuốc làm giảm hấp thu và tăng thải trừ lipid. Cholestyramin là nhựa trao đổi anion [37], [45], [81]. Cỏc nhựa này mang điện tớch dương sẽ gắn vào cỏc acid mật mang
điện tớch õm làm tăng bộc lộ cỏc thụ thể LDL ở mặt tế bào gan để tăng cường thu nạp LDL-C từ huyết tương và làm tăng hoạt tớnh của HMG-CoA reductase, là enzym kiểm soỏt tổng hợp cholesterol. Số lượng LDL receptor ở
gan tăng làm tăng việc gắn LDL-C từ huyết tương nờn làm hạ cholesterol huyết tương. Cholestyramin với liều 1,6g/kg/24giờ đó làm giảm rừ rệt CT 34,3%; TG 26,28%; LDL-C 56,63%; đồng thời làm tăng HDL-C 28,04% so với nhúm chuột gõy tăng lipid mỏu khụng điều trị (p3-2 < 0,05-0,01) [6], [81].
Mụ hỡnh thực nghiệm tăng cholesterol trờn chuột cống bằng cho uống cholesterol thường dựng cho thử cỏc thuốc cú ảnh hưởng làm giảm hấp thu và tăng thải trừ cholesterol, ớt cú tỏc dụng đỏnh giỏ sự ức chế sinh tổng hợp cholesterol [6], [81].
Hiện nay cú nhiều thuốc khỏc nhau đó và đang được sử dụng điều trị
rối loạn lipid mỏu như Cholestyramin, Lipanthyl, Simvastatin, Pravastatin... Tất cả cỏc thuốc này được xếp thành hai nhúm: Thuốc ảnh hưởng đến hấp thu và thải trừ lipid và nhúm thuốc ảnh hưởng đến sinh tổng hợp lipid [6], [37], (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
[81]. Thực nghiệm này chỉ mới cho thấy nấm Hồng chi Đà Lạt cú tỏc dụng hạ
lipid mỏu theo cơ chế ngoại sinh, NHC đó cú tỏc dụng ức chế quỏ trỡnh hấp thu và tăng thải trừ tớch cực cholesterol. Như vậy cần cú những đỏnh giỏ thờm tiếp theo về nấm Hồng chi.
4.3. TÁC DỤNG CỦA NẤM HỒNG CHI ĐÀ LẠT TRONG ĐIỀU TRỊ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN LIPID MÁU Ở NGƯỜI THễNG QUA MỘT SỐ CHỈ SỐ LÂM SÀNG VÀ CẬN LÂM SÀNG
4.3.1. Mối tương quan giữa cỏc yếu tố liờn quan với cỏc chỉ số lipid:
- Kết quả nghiờn cứu cho thấy: bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu thường cú thúi quen: lười vận động, thớch ăn ngọt, thớch ăn mỡ, hỳt thuốc lỏ, dư cõn và bộo phỡ (biểu đồ 3.2 và bảng 3.24). Nghiờn cứu này cũng phự hợp với nghiờn cứu của cỏc tỏc giả nước ngoài về sự tồn tại đồng thời của cỏc yếu tố nguy cơ. Nghiờn cứu của San Antonio thấy cú tỡnh trạng phối hợp giữa bộo phỡ, đỏi thỏo
đường týp 2, tỡnh trạng suy giảm dung nạp glucose với tăng cholesterol và tăng triglycerid mỏu.
4.3.2. Sự liờn quan giữa cỏc biến lipid và huyết ỏp:
Bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú tăng huyết ỏp chiếm 61,45% (bảng 3.28). Nghiờn cứu này cũng phự hợp với nghiờn cứu của cỏc tỏc giả trong nước: Trương Thanh Hương và Phạm Gia Khải đó nghiờn cứu về sự biến đổi một số thành phần lipid mỏu trong 362 người bị tăng huyết ỏp cú 284 bệnh nhõn bị rối loạn lipid mỏu (chiếm 78,5%) [27]. Kết quả nghiờn cứu cũng phự hợp với nghiờn cứu của Giovanni de Simone tại Mỹ với nghiờn cứu Hypergel
trờn 2096 bệnh nhõn THA và 393 người cú HA bỡnh thường; nghiờn cứu này
đó cho biết: tỉ lệ bộo phỡ, tăng CT mỏu, bệnh tim mạch ở những bệnh nhõn cú THA cao hơn ở nhúm người cú HA bỡnh thường với p < 0,0001 [118]. Nghiờn cứu của Lindenstrom E, của Zanchetti A. cũng thấy cú sự tồn tại đồng thời của tăng huyết ỏp, tăng cholesterol và tăng triglycerid mỏu [103], [133].
* Ở những bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú tăng huyết ỏp (bảng 3.28) trị
số trung bỡnh của CT, TG, LDL-C, CT/HDL-C, LDL-C/HDL-C đều cú xu hướng cao hơn và đồng thời HDL-C lại cú xu hướng thấp hơn bệnh nhõn rối loạn lipid mỏu cú huyết ỏp bỡnh thường (p > 0,05). Khi nghiờn cứu về sự liờn quan giữa cỏc chỉ số lipid này với huyết ỏp cỏc tỏc giả nước ngoài cũng đó cú những nhận xột tương tự:
- Yu - An Ding và cộng sự ởĐài Loan [132] nghiờn cứu chức năng tiểu cầu và cỏc biến lipid mỏu trờn 71 bệnh nhõn THA cú so sỏnh với nhúm chứng gốm 37 người cũng đó đỏnh giỏ: tỉ lệ CT, TG và LDL-C ở nhúm THA cao hơn ở nhúm chứng khụng cú THA.
- David Ashton và cộng sự tại Anh [52] nghiờn cứu sư liờn quan giữa THA và rối loạn lipid mỏu ở 14077 phụ nữ từ 30 - 60 tuổi. Sau nghiờn cứu