- Biểu hiện lâm sàng. - Bệnh tích đại thể. - Bệnh tích vi thể.
2.3.4. Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh cầu trùng thỏ
2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.4.1. Phương pháp lấy mẫu
- Mẫu phân
Lấy mẫu phân mới thải của thỏ mắc bệnh cầu trùng và bình thường ở các lứa tuổi tại một số huyện thuộc tỉnh Bắc Giang.
Lấy mẫu phân của thỏ trước, trong và sau khi thử nghiệm phác đồ điều trị. Mẫu phân đảm bảo từ 10-20 gam/mẫu. Để riêng mỗi mẫu vào túi nilon nhỏ, mỗi mẫu đều có nhãn ghi rõ: tuổi thỏ, địa điểm, tình trạng vệ sinh thú y, trạng thái phân, thời gian lấy mẫu.
- Mẫu bệnh phẩm: lấy những đoạn ruột non, ruột già, gan… có biểu hiện
2.4.2. Phương pháp xác định các chỉ tiêu nghiên cứu
* Phƣơng pháp xác định tỷ lệ nhiễm cầu trùng thỏ
Chúng tôi sử dụng phương pháp Fulleborn để xét nghiệm mẫu phân thỏ, xác định tỷ lệ nhiễm Oocyst cầu trùng.
Phương pháp Fulleborn: Sử dụng dung dịch nước muối NaCl bão hoà để
xét nghiệm phân, tìm Oocyst cầu trùng dưới kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 100 lần (Phạm Văn Khuê và cs, (1996) [24])
* Phƣơng pháp xác định cƣờng độ nhiễm cầu trùng:
Xác định số lượng nang trứng cầu trùng trong 1 gam phân bằng buồng đếm Mc. Master.
- Cân 3 gam phân cho vào lọ thủy tinh. - Cho nước muối bão hòa tới vạch 45 ml. - Lắc và trộn đều cho phân tan hết.
- Lọc qua lưới lọc.
- Trộn đều và hút dung dịch cho lên 2 buồng đếm.
- Đếm số trứng trong 2 buồng đếm theo nguyên tắc đếm 2 cạnh. Cách tính:
+ Thể tích mỗi buồng đếm là 0,15 ml + Gọi số trứng đếm được là A
+ Số trứng trong tổng số 45ml là: 45 × A 0,15 + Số trứng có trong 1gam phân là: 45 × A
0,15 ×3
Phương pháp Mc. Master dùng để xác định cường độ nhiễm noãn nang cầu trùng.
Đếm số Oocyst cầu trùng trong 1g phân bằng buồng đếm Mc. Master và quy định theo các cường độ: nhẹ, trung bình, nặng và rất nặng. Cường độ nhiễm được quy định như sau:
≤ 5.000 Oocyst/ gam phân: cường độ nhiễm nhẹ (+).
> 5.000 - 10.000 Oocyst/gam phân: cường độ nhiễm trung bình (++). > 10.000 - 15.000 Oocyst/gam phân: cường độ nhiễm nặng (+++). > 15.000 Oocyst/gam phân: cường độ nhiễm rất nặng (++++).
*Phƣơng pháp định loài cầu trùng
Việc định loài cầu trùng dựa vào kích thước, hình thái, cấu tạo của Oocyst
cầu trùng theo khoá định loài của Kolapxki N.A, P.I. Paskin (1980) [33].
* Phƣơng pháp xác định thời gian hình thành bào tử của Oocyst cầu trùng
Để xác định thời gian hình thành bào tử của Oocyst cầu trùng chúng tôi thu nhận Oocyst cầu trùng bằng cách lấy những mẫu phân thỏ nhiễm cầu trùng nặng, tiến hành phương pháp Darling. Sau lần ly tâm thứ hai, vớt
Oocyst cầu trùng ở phía trên cho vào ống ly tâm đã có sẵn nước lã, tiếp tục
quay ly tâm rồi gạn nước ở phía trên, thu Oocyst cầu trùng ở đáy ống ly tâm. Nuôi cấy Oocyst cầu trùng trong dung dịch Bichromat kali 2,5% để theo dõi thời gian phát triển thành Oocyst có sức gây bệnh.
* Phân chia lứa tuổi thỏ.
Tuổi thỏ nghiên cứu được phân ra theo 6 lứa tuổi: - Thỏ 1 tháng tuổi. - Thỏ 2 tháng tuổi. - Thỏ 3 tháng tuổi. - Thỏ 4 tháng tuổi. - Thỏ từ 5 - 12 tháng tuổi. -Thỏ > 12 tháng tuổi.
* Tình trạng vệ sinh thú y trong chăn nuôi thỏ
Tình trạng vệ sinh thú y được đánh giá theo 3 mức độ:
- Tình trạng vệ sinh thú y tốt: chuồng trại cao ráo, thoáng mát, sạch sẽ. Đáy lồng chuồng phải nhẵn, phẳng, có khe hở, rãnh thoát phân nước tiểu dễ
dàng, ít thấm nước và tháo ra lắp vào được. Chuồng được cọ rửa và dọn phân thường xuyên, không có hiện tượng tồn phân quá 1 ngày. Thức ăn, nước uống đảm bảo đủ và sạch sẽ, máng ăn, máng uống phải thường xuyên cọ rửa. Rau xanh được rửa sạch, để khô trước khi cho thỏ ăn. Định kỳ khử trùng tiêu độc chuồng trại, dụng cụ chăn nuôi.
- Tình trạng vệ sinh thú y trung bình: lồng chuồng được làm bằng nhiều vật liệu khác nhau như gỗ, sắt… song không thường xuyên dọn phân, có hiện tượng tồn phân quá 2 ngày trong chuồng. Mỗi tuần cọ rửa máng ăn, máng uống 1-2 lần.
- Tình trạng vệ sinh thú y kém: đáy lồng chuồng ẩm thấp, không có rãnh thoát nước tiểu, phân, không cọ rửa chuồng và dọn phân, có hiện tượng tồn phân trong chuồng một vài tuần. Máng ăn, máng uống không được cọ rửa.
* Mùa vụ:
Chúng tôi thực hiện đề tài trong thời gian 1 năm (từ tháng 10/2009 - 10/2010) và phân thành hai mùa vụ:
- Vụ Xuân - Hè: Từ tháng 02 - tháng 08.
- Vụ Thu- Đông: Từ tháng 09 năm trước - tháng 01 năm sau.
* Phƣơng pháp theo dõi các biểu hiện lâm sàng của thỏ bị bệnh cầu trùng
Biểu hiện lâm sàng được xác định ở những thỏ mà kết quả xét nghiệm phân là nhiễm cầu trùng ở mức độ nặng và rất nặng. Phương pháp chủ yếu là quan sát những biểu hiện của thỏ: thể trạng, niêm mạc, trạng thái phân…
* Phƣơng pháp xác định bệnh tích đại thể
Mổ khám những thỏ bị bệnh cầu trùng ở mức độ rất nặng (có biểu hiện lâm sàng của bệnh cầu trùng), quan sát bằng mắt thường và kính lúp các phần của ruột non, ruột già, gan. Chụp ảnh vùng có bệnh tích điển hình.
* Phƣơng pháp xác định những biến đổi bệnh lý vi thể ở một số cơ quan do cầu trùng gây ra
phẩm được gửi về Trung tâm Chẩn đoàn Thú y Quốc gia làm tiêu bản vi thể theo quy trình tẩm đúc parafin. Mỗi bệnh phẩm đúc 4 block và mỗi block chọn 5 tiêu bản cắt mỏng, nhuộm Hematoxilin - Eosin (H.E). Đọc kết quả bằng kính hiển vi quang học có độ phóng đại tối đa là 1.500 lần.
- Quy trình làm tiêu bản vi thể được tiến hành như sau:
+ Lấy bệnh phẩm: cắt phần bệnh phẩm có nhiều tổn thương do cầu trùng + Cố định bệnh phẩm bằng dung dịch formol 10%.
+ Rửa nước 12 - 24 giờ (rửa dưới dòng nước chảy nhẹ) để trôi hết formol. + Khử nước: dùng cồn tuyệt đối để rút nước từ bệnh phẩm ra.
+ Làm trong tiêu bản: ngâm bệnh phẩm qua hệ thống xylen để làm trong bệnh phẩm.
+ Tẩm parafin: ngâm bệnh phẩm đã làm trong vào các cốc đựng parafin nóng chảy, để ở tủ ấm nhiệt độ 500C.
+ Đổ Block: rót parafin nóng chảy vào khuôn giấy rồi đặt miếng tổ chức (bệnh phẩm) đã tẩm parafin vào. Khi parafin đông đặc hoàn toàn thì bóc khuôn. Sửa lại block cho vuông vắn.
+ Cắt và dán mảnh: cắt bệnh phẩm trên máy cắt Microcom, độ dày mảnh cắt khoảng 3 - 4 µm. Dán mảnh cắt lên phiến kính bằng dung dịch Mayer (lòng trắng trứng 1 phần, glyxerin 1 phần, 1ml hỗn hợp trên pha trong 19ml nước cất).
+ Nhuộm tiêu bản bằng phương pháp Hematoxilin - eosin.
+ Gắn lamen bằng Bom canada, dán nhãn và đọc kết quả dưới kính hiển vi.
*Thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh cầu trùng thỏ.
Chúng tôi căn cứ vào kết quả xét nghiệm phân và những biểu hiện lâm sàng của thỏ để dùng thuốc điều trị cầu trùng.
Những thỏ bị nhiễm cầu trùng ở mức độ nặng và rất nặng chia thành 6 nhóm điều trị với 3 loại thuốc khác nhau. Thí nghiệm được thực hiện với phác
Phác đồ điều trị thử nghiệm bệnh cầu trùng thỏ Lô thí
nghiệm
Số thỏ thí
nghiệm Loại thuốc/ liều lƣợng/ liệu trình
Nhóm 1 14 Phar- Coccitop 1g/3,3kg TT; liệu trình 4-3-4 Nhóm 2 14 Phar- Coccitop 1g/1,6kg TT; liệu trình 5-3-5 Nhóm 3 12 Vimecox - SPE3/ 8kgTT; liệu trình 4-3-4 Nhóm 4 12 Vimecox - SPE31g/ 4kgTT; liệu trình 5-3-5
Nhóm 5 14 Marcoc 1g/6kg TT; liệu trình 4-3-4 Nhóm 6 14 Marcoc 1g/3kg TT; liệu trình 5-3-5
Sau khi cho thỏ sử dụng thuốc 5-10 ngày, xét nghiệm lại phân của những thỏ đã được dùng thuốc. Nếu không tìm thấy Oocyst trong phân thì xác định thuốc có hiệu lực triệt để. Nếu vẫn thấy Oocyst trong phân nhưng số lượng Oocyst /g phân giảm rõ rệt thì xác định thuốc có hiệu lực nhưng chưa triệt để. Nếu thấy số lượng Oocyst /g phân vẫn không giảm so với trước khi dùng thuốc hoặc giảm không đáng kể thì xác định thuốc không có hiệu lực.
-Xác định độ an toàn của thuốc điều trị bệnh cầu trùng: Độ an toàn của thuốc được đánh giá bằng kết quả theo dõi trạng thái cơ thể, sự vận động, ăn uống của thỏ trước dùng thuốc 1 giờ và sau dùng thuốc 3 giờ.
* Đề xuất biện pháp phòng trừ tổng hợp bệnh cầu trùng thỏ.
Dựa trên đặc điểm dịch tễ và kết quả thử nghiệm sử dụng thuốc điều trị cầu trùng cho thỏ để đề xuất biện pháp phòng trừ tổng hợp bệnh cầu trùng.
2.4.3. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu thập được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học của Nguyễn Văn Thiện (2000) [31] và thực hiện trên phần mềm Excel.
Số thỏ nhiễm Tỷ lệ nhiễm (%) =
i i i X X X m + m Tỷ lệ cường độ nhiễm (%) = * Các tham số thống kê: - Số trung bình mẫu:
Số thỏ nhiễm ở mỗi cường độ Tổng số thỏ nhiễm
X = Σx i n
x 100
∑xi : Tổng các giá trị của x n : Dung lượng mẫu.
X : Số trung bình mẫu. - Độ lệch tiêu chuẩn: Σx 2 −( Σx ) 2 n + Với n > 30: Sx = ± n ( Σx ) 2 + Với n ≤ 30: Sx = ± Σx 2 − i n Trong đó: n - 1 S : Độ lệch tiêu chuẩn Xi : Giá trị của mẫu n : Dung lượng mẫu
- Sai số của số trung bình:
Với n > 30: x= ± Sx n S + Với n ≤ 30: = ± x x n - 1 Trong đó: m : Sai số của số trung bình
S : Độ lệch tiêu chuẩn n : Dung lượng mẫu
*Chỉ tiêu theo dõi hiệu quả thuốc bằng các cách tính sau: Hiệu quả tẩy sạch noãn nang (%) = N1 − N2
N1 × 100
Trong đó:
N1 = số noãn nang /1 gam phân trước khi cho thuốc.
N2 = Số noãn nang /1gam phân sau khi chấm dứt phác đồ điều trị (ngày).
Chƣơng 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ của bệnh cầu trùng thỏ
3.1.1. Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm cầu trùng trên giống thỏ nội và thỏ NewZealand tại một số huyện của tỉnh Bắc Giang Zealand tại một số huyện của tỉnh Bắc Giang
Qua kiểm tra 870 mẫu phân thỏ thu thập ở 3 huyện, thành phố thuộc tỉnh Bắc Giang, kết quả được trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1 Tỷ lệ nhiễm nhiễm cầu trùng trên giống thỏ nội và thỏ New Zealand tại một số huyện của tỉnh Bắc Giang
Thỏ nội Thỏ New Zealand Tính chung
Số thỏ kiểm tra (con) Số thỏ nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Số thỏ kiểm tra (con) Số thỏ nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Số thỏ kiểm tra (con) Số thỏ nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Tân Yên 124 83 66.94 155 109 70.32 279 192 68.82 Hiệp Hoà 115 68 59.13 168 115 68.45 283 183 64.66 TP Bắc Giang 141 80 56.74 167 110 65.87 308 190 61.69 Tổng 380 231 60.79 490 334 68.16 870 565 64.94
Chúng tôi đã xác định được tỷ lệ nhiễm cầu trùng trên giống thỏ nội và thỏ New Zealand tại địa bàn tỉnh Bắc Giang, kết quả ở bảng 3.1 cho thấy:
Trong tổng số 870 thỏ kiểm tra có 565 thỏ nhiễm cầu trùng, tỷ lệ nhiễm chung là 64,94%, tuỳ theo địa phương trong đó huyện Tân Yên có tỷ lệ nhiễm cao nhất (68,82%), sau đó huyện Hiệp Hoà (64,66%) và thấp nhất là TP Bắc Giang (61,69%).
So sánh tỷ lệ nhiễm cầu trùng trên hai giống thỏ nội và thỏ New Zealand, chúng tôi nhận thấy tỷ lệ nhiễm cầu trùng giữa hai giống thỏ có sự khác nhau rõ rệt (P<0,05). Thỏ New Zealand có tỷ lệ nhiễm cao hơn (68,16%), thỏ nội
So sánh tỷ lệ nhiễm cầu trùng ở thỏ nuôi tại 3 huyện, thành phố của tỉnh Bắc Giang chúng tôi thấy:
- Đối với thỏ nội: Nuôi tại huyện Tân Yên nhiễm với tỷ lệ cao nhất, rồi
đến thỏ ở huyện Hiệp Hoà và thấp nhất là thỏ nuôi tại TP Bắc Giang (tỷ lệ thỏ Nội nhiễm cầu trùng tương ứng là 66,94%, 59,13% và 56,74%).
- Đối với thỏ New Zealand: Kết quả tương tự như ở thỏ nội, thỏ nuôi tại
huyện Tân Yên nhiễm với tỷ lệ cao nhất, rồi đến thỏ ở huyện Hiệp Hoà và thấp nhất là thỏ nuôi tại TP Bắc Giang (tỷ lệ thỏ New Zealand nhiễm cầu trùng tương ứng là 70,32%, 68,45%, 65,87%).
Huyện Tân Yên có tỷ lệ nhiễm cầu trùng cao theo nhận xét của chúng tôi đây là huyện miền núi, chăn nuôi thỏ chủ yếu theo hình thức tận dụng, không đảm bảo kỹ thuật, chuồng trại không vệ sinh thường xuyên, đây là nguyên nhân dẫn đến tỷ lệ nhiễm cầu trùng cao. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với nghiên cứu của Nguyễn Hữu Hưng, Nguyễn Thị Mỹ An (2008)[7] các tác giả cho rằng thỏ nhiễm cầu trùng với tỷ lệ từ 58,47% đến 69,50%.
3.1.2. Kết quả xác định cường độ nhiễm cầu trùng trên giống thỏ nội và thỏNew Zealand tại một số huyện của tỉnh Bắc Giang New Zealand tại một số huyện của tỉnh Bắc Giang
Xác định tỷ lệ nhiễm là một chỉ tiêu quan trọng, song việc xác định mức độ nhiễm còn quan trong hơn vì từ kết quả này có thể nghiên cứu về bệnh lý và lâm sàng của bệnh để có biện pháp phòng, trị hợp lý.
Chúng tôi đã đánh giá cường độ nhiễm cầu trùng trên giống thỏ nội và thỏ New Zeland tại 3 huyện, TP thuộc tỉnh Bắc Giang, kết quả thể hiện ở bảng 3.2.
Bảng 3.2. Cƣờng độ nhiễm cầu trùng thỏ tại một số huyện thuộc tỉnh Bắc Giang Địa điểm Số thỏ nội Cƣờng độ nhiễm (thỏ nội) Số thỏ N.Zealand Cƣờng độ nhiễm (thỏ N.Zealand) (+) (++) (+++) (++++) (+) (++) (+++) (++++) n % n % n % n % n % n % n % n % Tân Yên 83 52 62.65 15 18.07 9 10.84 7 8.43 109 59 54.13 24 22.02 16 14.68 10 9.17 Hiệp Hoà 68 30 44.12 20 29.41 15 22.06 3 4.41 115 67 58.26 22 19.13 18 15.65 8 6.96 TP Bắc Giang 80 36 45.00 29 36.25 11 13.75 4 5.00 110 52 47.27 31 28.18 22 20.00 5 4.55 Tổng 231 118 51.08 64 27.71 35 15.15 14 6.06 334 178 53.29 77 23.05 56 16.77 23 6.89
Qua bảng 3.2 chúng tôi thấy cả hai giống thỏ nội và New Zealand đều nhiễm cầu trùng ở cường độ nhiễm từ nhẹ đến rất nặng.
Đối với thỏ nội:
Tính chung trong tổng số 231 thỏ nhiễm cầu trùng, có 118 thỏ nhiễm ở cường độ nhẹ, chiếm tỷ lệ 51,08%; 64 thỏ nhiễm ở cường độ trung bình, chiếm tỷ lệ 27,71%; 35 thỏ nhiễm ở cường độ nặng, chiế m tỷ lệ 15,15%; 14 thỏ nhiễm ở cường độ rất nặng, chiếm tỷ lệ 6,06%. Cường độ nhiễm cầu trùng thỏ ở 3 huyện, thành phố cụ thể như sau:
- Cường độ nhiễm nhẹ: 231 thỏ nhiễm cầu trùng nhẹ, thấy: Huyện Tân Yên có 52 thỏ, chiếm tỷ lệ 62,65%. Huyện Hiệp Hoà có 30 thỏ, chiếm tỷ lệ 44,12%. Thành phố Bắc Giang có 36 thỏ, chiếm tỷ lệ 54,00%.
- Cường độ nhiễm trung bình: Trong tổng số 64 thỏ nhiễm cầu trùng ở mức trung bình, thấy: Huyện Tân Yên có 15 thỏ, chiếm tỷ lệ 18,07%. Huyện Hiệp Hoà có 20 thỏ, chiếm tỷ lệ 29,41%. Thành phố Bắc Giang có 29 thỏ, chiếm tỷ lệ 36,25%.
- Cường độ nhiễm nặng: Trong tổng số 35 thỏ nhiễm cầu trùng ở mức nặng, thấy: Huyện Tân Yên có 9 thỏ, chiếm tỷ lệ 10,84%. Huyện Hiệp Hoà có 15 thỏ, chiếm tỷ lệ 22,06 %. Thành phố Bắc Giang có 11 thỏ, chiếm tỷ lệ