Phõn tớp mụ bệnh học Ung thư biểu mụ tuyến Theo (IASLC/ATS/ERS 2011)
Mó hỡnh thỏi học (Theo WHO 2015)
Ung thư biểu mụ tuyến 8140/3
Ung thư biểu mụ tuyến lepidic 8250/3
Ung thư biểu mụ tuyến chựm nang 8551/3
Ung thư biểu mụ tuyến nhỳ 8260/3
Ung thư biểu mụ tuyến vi nhỳ 8265/3
Ung thư biểu mụ tuyến đặc 8230/3
Ung thư tuyến nhầy xõm lấn 8253/3
Biến thể
Ung thư hỗn hợp nhầy và khụng nhầy xõm lấn 8254/3
Ung thư biểu mụ tuyến “dạng keo” 8480/3
Ung thư biểu mụ tuyến thai 8333/3
Phõn độ biệt húa MBH của UTBMT theo Travis D và cộng sự (2013 [39]:
+ Độ I: UTBMT dạng Lepedic
+ Độ II: UTBMT dạng nang và dạng nhỳ
+ Độ III: UTBMT dạng đặc, dạng vi nhỳ và cỏc biến thể của UTBMT Tiờu chuẩn chẩn đoỏn cỏc tớp UTBMT:
+ Tổn thương Lepedic: Là sự phỏt triển khụng điển hỡnh cỏc tế bào hỡnh vuụng đơn đan dọc theo thành phế nang cú cỏc đặc điểm: Duy trỡ cấu trỳc phế nang, khụng cú sẹo xơ trung tõm hay lan rộng, thường dày phế nang, khụng cú hoặc ớt phỏt triển dạng tầng, khụng tạo cấu trỳc nhỳ.
Hỡnh 2.5. Tổn thương MBH Lepedic HE x 200 [96]
+ Ung thư biểu mụ tuyến dạng chựm nang (Acinar adenocarcinoma):
U cú dạng nang, tỳi tuyến hoặc ống tuyến với cỏc tế bào hỡnh trụ hoặc hỡnh vuụng, nhõn lệch đỏy, gợi ý tuyến của phế quản
Hỡnh 2.6. UTBMT dạng chựm nang HE x 100 [96]
+ Ung thư biểu mụ tuyến nhỳ (Papillary adenocarcinoma): U thường
đơn độc bao gồm cấu trỳc nhỳ được phủ bởi tế bào kớch thước lớn, khụng điển hỡnh với nhõn lớn, tăng sắc, hạt nhõn rừ, nhiều nhõn chia.
Hỡnh 2.7. UTBMT nhỳ HE x 200 [96]
+ Ung thư biểu mụ tuyến vi nhỳ (micropapillary adenocarcinoma):
Cấu trỳc u gồm cỏc tế bào phỏt triển tạo thành cỏc nhỳ nhỏ, khụng cú cục liờn kết xơ mạch. U cú thể liờn tục với thành phế nang hoặc khụng. Tế bào u thường nhỏ, vuụng đơn, nhõn khụng điển hỡnh mức độ nhẹ. Thường cú xõm
Hỡnh 2.8. UTBMT vi nhỳ HE x 400 [96]
+ Ung thư biểu mụ tuyến nhầy xõm lấn: Cấu trỳc u gồm cỏc tế bào
trụ cú chế nhầy ở cực ngọn, nhõn nhỏ nằm ở cực đỏy.Tế bào u lút dọc thành phế nang, cú thể tạo cấu trỳc nhỳ.
Hỡnh 2.9. Hỡnh UTBMT nhầy xõm lấn HE x 400 [80]
+ Ung thư biểu mụ tuyến đặc (Solid adenocarcinoma): U khụng cú
cấu trỳc nhỳ, ống nang mà thay vào đú là cỏc mảng tế bào hỡnh đa diện nhưng cú ớt nhất 5 tế bào chế nhầy trờn 2 vi trường cú độ phúng đại lớn.
Hỡnh 2.10. UTBMT đặc HE, DPAS x 400 [8]
+ Ung thư biểu mụ tuyến tớp bào thai (Fetal Adenocarcinoma):
Thường gặp ở độ tuổi trẻ hơn cỏc tớp khỏc. U gồm cỏc tuyến ống được lút bởi tế bào trụ khụng cú lụng nhung với bào tương sỏng, nhõn nằm ở cực đỏy, thường cú hốc. Đụi khi u gợi hỡnh ảnh u nguyờn bào phụi tớp đơn pha, thường do đột biến gen betacatenin.
Hỡnh 2.11. UTBMT dạng bào thai [8]
+ Ung thư biểu mụ tuyến nhầy dạng keo (Mucinous colloid adenocarcinoma): U cú đặc điểm giống với cỏc loại u cựng tờn ở đường tiờu húa,
gồm cỏc cấu trỳc ống, tuyến kớch thước khụng đều, mụ đệm cú nhiều chất nhầy đặc quỏnh. Tế bào u trụi nổi trong bể chất nhầy.
Hỡnh 2.12. UTBMT nhầy dạng keo HE x 400 [86]
+ Ung thư biểu mụ tuyến tớp ruột (Enteric adenocarcinoma): Hỡnh thỏi mụ học giống với UTBMT đại trực tràng với cấu trỳc nhỳ, đụi khi dạng sàng, được lút bởi tế bào trụ cao, giả tầng, lũng chứa chất hoại tử với cỏc mảnh nhõn vụn.
Hỡnh 2.13. UTBMT tớp ruột HE x 200 [80]
Tỷ lệ bộc lộ cỏc dấu ấn húa mụ miễn dịch của cỏc tớp MBH
2.2.4.4. Nghiờn cứu đột biến EGFR
Trong phạm vi của đề tài chỳng tụi tiến hành được 93 bệnh nhõn xột nghiệm đột biến gen EGFR. Cỏc mẫu bệnh phẩm sẽ được gửi đến Trung
Tõm Gene-protein trường Đại Học Y Hà Nội hoặc Đơn Vị Gen Trị Liệu- Trung Tõm Ung Bướu-Bệnh Viện Bạch Mai làm xột nghiệm xỏc định đột
o Kỹ thuật giải trỡnh tự gene trực tiếp o Kỹ thuật Scorpions ARMS
o Kỹ thuật Strip Assay.
Bước đầu tiờn của cả 2 kỹ thuật là tỏch chiết DNA từ mẫu mụ ung thư:
- Lựa chọn chớnh xỏc vựng tế bào ung thư từ mẫu bệnh phẩm - Loại bỏ parafin bằng xylen
- Tỏch chiết DNA theo quy trỡnh phenol/ chloroform
- Kiểm tra nồng độ và độ tinh sạch của DNA bằng mỏy Nano-Drop. Kỹ thuật giải trỡnh tự gene trực tiếp
- Khuếch đại cỏc exon 18, 19, 20 và 21 của gene EGFR bằng kỹ thuật Nested PCR.
- Tinh sạch sản phẩm PCR từ gel agarose bằng Promega Wizard SV gel clean-up system (Promega, USA).
- Giải trỡnh tự gen bằng phương phỏp BigDye terminator sequencing (Applied Biosystems, Foster city, USA).
- Trỡnh tự gene sẽ được so sỏnh với trỡnh tự gene kiểu hoang dại trờn ngõn hàng gene (National center for biotechnology information, NCBI).
Kỹ thuật scorpions - amplification refractory mutation system (ARMS):
- Là sự kết hợp giữa kỹ thuật khuếch đại alen đột biến (ARMS) và cụng nghệ scorpions trong phản ứng real- time PCR để tỡm đột biến.
- Nguyờn lý của kỹ thuật là dựa vào đặc tớnh của TaqDNA polymerase chỉ khuếch đại 1 sợi DNA hoàn chỉnh khi đầu 3’ của mồi và đoạn DNA khuụn bổ sung hoàn toàn với nhau. Khi đầu 3’ của mồi và sợi khuụn khụng bổ sung với nhau, phản ứng PCR sẽ bị ức chế hoàn toàn.
- Quy trỡnh thực hiện theo kit của hóng QIAGEN (Đức). Kỹ thuật StripAssay:
- Tỏch DNA từ mẫu mụ: sử dụng kit QIAampđ DNA FFPE Tissue Kit của hóng QIAGEN.
- Khuếch đại đoạn gen quan tõm bằng phản ứng PCR - Lai sản phẩm khuếch đại với đầu dũ đặc hiệu
- Phõn tớch kết quả bằng phần mềm
- Quy trỡnh thực hiện theo kit của hóng Viennalab (Áo). Đỏnh giỏ kết quả:
- Cú đột biến hay khụng đột biến, vị trớ đột biến, loại đột biến
- Tỡm hiểu mối liờn quan giữa đột biến EGFR với một số đặc điểm lõm sàng, CLVT, cỏc phõn tớp MBH theo phõn loại của IASLC/ATS/ERS 2011.
2.2.5. Xử lý số liệu
- Sử dụng phần mềm thống kờ y học SPSS 22.0
- Thuật toỏn sử dụng: so sỏnh giữa cỏc tỷ lệ bằng Test thống kờ χ² với mức ý nghĩa 95% (p= 0,05).
- Cỏc thuật toỏn thống kờ sử dụng: + Tớnh tỷ lệ phần trăm
+ Tớnh giỏ trị trung bỡnh
+ Độ lệch chuẩn và test ANOVA
+ Sử dụng test χ2 khi so sỏnh 2 tỷ lệ với tần số mong đợi ≥ 5 hoặc Fisher’s exact test nếu tần số mong đợi < 5.
+ Tớnh hệ số tương quan r : -1 đến +1
2.3. VẤN ĐỀ ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIấN CỨU
Cỏc thụng tin khai thỏc từ bệnh nhõn và hồ sơ bệnh ỏn đều được giữ bớ mật. Cỏc xột nghiệm xõm lấn giỳp cho chẩn đoỏn như sinh thiết xuyờn thành ngực, nội soi phế quản...được sự đồng ý chấp thuận của người bệnh.
Nghiờn cứu này chỉ nhằm mục đớch duy nhất là nõng cao chất lượng chẩn đoỏn và điều trị, đỏnh giỏ tiờn lượng, phục vụ cụng tỏc bảo vệ và chăm súc sức khỏe nhõn dõn và nõng cao chất lượng cuộc sống cho người bệnh.
Đề cương nghiờn cứu được Hội đồng chấm đề cương nghiờn cứu sinh Trường Đại học Y Hà Nội và được sự cho phộp của Lónh đạo Bệnh viện, Khoa, Bộ mụn và cỏc phũng ban chức năng.
2.4. SƠ ĐỒ Mễ HèNH NGHIấN CỨU
Lõm sàng Xq tim phổi thẳng nghiờng, CLVT lồng ngực cú tiờm thuốc cản quang Hướng nhiều đến u phổi
(N= 340)
XN cơ bản, NSPQ, cỏc phương phỏp lấy bệnh phẩm sinh thiết
(STXTN, NSTT, NSLN)
Bệnh phẩm sinh thiết (320)
Nhuộm thường qui (HE,PAS)
HMMD (Marker đặc hiệu) (n= 52)
UTBMT (Nhúm NC, n=245)
Phõn loại MBH (IASLC/ATS/ERS 2011) Đột biến EGFR, kết quả và bàn luận
Loại (7 BN) UTBMV Loại (68BN) chẩn đoỏn khỏc (+) (200BN) (+) (-) (45BN) (±)
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIấN CỨU
Nghiờn cứu được thực hiện tại Trung Tõm Hụ Hấp – Trung Tõm Giải Phẫu Bệnh - Bệnh viện Bạch Mai từ thỏng 04/2014 đến thỏng 11/2015 với 245 BN được chẩn đoỏn xỏc định là UTBMTPQ đỏp ứng đủ tiờu chuẩn nghiờn cứu, chỳng tụi thu được cỏc kết quả sau:
3.1. ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, CẬN LÂM SÀNG 3.1.1. Đặc điểm về tuổi và giới 3.1.1. Đặc điểm về tuổi và giới