Cao methanol Trích ly Lọc Cơ quay Cao nước Nước Cao ethyl acetate Ethyl acetate
36
Một phần cao methanol sẽ được phân tán trong dung môi methanol và lượng nước tối thiểu tạo dạng sệt và tiến hành trích ly lỏng-lỏng với dung mơi ethyl acetate.
Dịch trích được lọc qua giấy lọc và thu hồi dung môi bằng hệ thống cơ quay. Cao trích thu được là cao ethyl acetate. Phần còn lại là cao nước.
2.3.2. Xác định hoạt tính chống oxy hố 2.3.2.1. Tổng hàm lượng polyphenol
Nguyên tắc
Polyphenol từ phần mẫu thử của cao trích đã nghiền mịn được chiết bằng metanol 70 % ở 70 °C. Các polyphenol trong dịch chiết được xác định bằng đo màu, dùng thuốc thử Folin-Ciocalteu trong môi trường kiềm. Thuốc thử này chứa chất oxi hóa là axit phospho- vonframic, trong q trình khử, các nhóm hydroxy phenol dễ bị oxi hóa, chất oxi hóa này sinh ra màu xanh có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 760 nm. Phản ứng này là do sự hình thành màu xanh của vonfarm và molypden. Tổng hàm lượng polyphenol được tính tốn bằng cách quy về lượng tương đương với chất chuẩn acid galic, được biểu diễn theo số mg acid galic/g chất khô (TCVN 9745-1:2013).
Thuyết minh quy trình
Chiết polyphenol trong hạt me: Cân chính xác 0.200g mẫu cho vào ống hach, tiếp tục
cho vào ống hach đó 10.0mL Methanol (7:3). Sau đó, hỗn hợp được đậy nắp, lắc đều và được đun nóng ở 70oC trong 10 phút trong bể điều nhiệt, trộn vortex sau mỗi 5 phút.
Pha loãng dịch chiết mẫu: Tuỳ theo nồng độ polyphenol có trong mẫu mà ta có thể
pha lỗng ở hệ số thích hợp với nước cất.
Lên màu: Rút 1.3mL dịch chiết đã pha loãng vào ống hach, tiếp tục cho thêm 1.0mL
thuốc thử Folin-Ciocalteu 20% vào mỗi ỗng, sau đó lắc đều dung dịch và để yên trong 3-8 phút.Sau đó, cho thêm 700µL Na2CO3 10% vào dung dịch và lắc đều, tiếp tục để yên dung dịch ở nhiệt độ phòng trong 30 phút. Sau 30 phút, dung dịch được tiến hành đo mật độ quang ở bước sóng λ=760nm.
37