NAC2-XbaI/NAC2-SacI 8 dòng plasmid tách từ Agrobacterium
Như vậy, chúng tôi đã tạo được chủng A.tumefaciens CV58 mang plasmid tái tổ hợp pBI121:NAC2. Đây là nguồn nguyên liệu phục vụ cho nghiên cứu chuyển
gen nhằm tạo cây trồng với mong muốn cải thiện được đặc tính chịu hạn.
Chuyển cấu trúc mang gen mã hóa nhân tố phiên mã NAC2 vào cây thuốc lá thông qua vi khuẩn A.tumefaciens CV58
Để kiểm tra hoạt động của cấu trúc pBI121:NAC2 trong cây, bước đầu chúng tôi thử nghiệm chuyển cấu trúc vào thuốc lá, một trong những cây mơ hình phục vụ cho nghiên cứu chuyển gen ở thực vật.
Cấu trúc pBI121:NAC2 mang promoter 35S điều khiển hoạt động của gen
NAC2 được chuyển vào mảnh lá cây thuốc lá giống C91. Các dòng cây chuyển gen
được tái sinh trên môi trường chọn lọc chứa kháng sinh kanamycin nồng độ 50 mg/l. Chỉ những cây thuốc lá mang gen chuyển mới có thể sống sót trên mơi trường chọn lọc. 194 dòng cây được chúng tơi đưa ra trồng ngồi điều kiện tự nhiên.
Bảng 3.8. Kết quả chuyển cấu trúc mang gen NAC2 vào cây thuốc lá Lơ thí nghiệm Số mẫu biến nạp Số mẫu tạo chồi
Số chồi trên môi trƣờng ra rễ Số cây ra giá thể 1 50 48 86 67 2 50 45 82 62 3 50 47 80 65 Tổng 150 140 248 194
Hình 3.18. Hình ảnh chuyển cấu trúc mang gen mã hóa nhân tố phiên mã NAC2
vào cây thuốc lá
A. Mảnh lá trên môi trường GM; B. Mảnh lá ngâm trong dịch huyền phù vi khuẩn; C. Mảnh lá trên môi trường cộng sinh; D. Mảnh lá trên môi trường GM + KS; E. Cụm chồi trên môi trường GM + KS; F. Cây con trên môi trường RM + KS; G. Ra
cây trong bầu đất:trấu:cát; H. Cây trong bầu đất; I. Ra nhà lưới.