CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.3. CÁC PHƢƠNG PHÁP PHỊNG THÍ NGHIỆM DÙNG TRONG CHẨN
1.3.5. Phƣơng pháp xác định trình tự gen Sanger sequencing
Giải trình tự gen để xác định trình tự nucleotid (protein) trong vật liệu di truyền của vi sinh vật.Nguyên lý phản ứng dựa trên nguyên tắc của phƣơng pháp Sanger có sử dụng các dideoxynucleotide. Mỗi loại dideoxynucleotide đƣợc đánh dấu bằng một chất huỳnh quang có màu khác nhau. Sự xuất hiện của các dideoxynucleotide (các nucleotide mất gốc -OH ở vị trí cacbon 3' và đƣợc thay bằng -H, đã đƣợc đánh dấu huỳnh quang với các màu khác nhau) trong quá trình tổng hợp ADN bổ sung (mẫu gen cần giải trình tự ở dạng ADN sợi đơn) tạo ra những đoạn ADN có độ dài khác nhau. Những đoạn ADN này đƣợc điện di qua mao quản từ nhỏ đến lớn và các dideoxynucleotide đƣợc phát hiện bởi đầu đọc laser. Hiện nay, các phƣơng pháp xác định trình tự gen đƣợc thực hiện trên máy phân tích trình tự chuỗi tự động nhƣ ABI 3130-Avant, BechmanCounter (Mỹ).
*Ứng dụng:
Hiện nay, giải trình tự đang là xu thế phát triển và đƣợc ứng dụng cao trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu khác nhau nhƣ giải trình tự để định danh, định typ vi khuẩn, vi rút, nhận dạng cá thể, nhận dạng loài, xác định đột biến gen, ứng dụng trong sản xuất vắc xin, điều trị đích ung thƣ. . . .
- Xác định đột biến, sự sai khác về trình tự nucleotit trong cùng một sản phẩm gen, có ý nghĩa trong nghiên cứu tiến hóa và ứng dụng thực tiễn.
- Tạo ra các sinh vật mới mang những đặc tính mong muốn hoặc có thể chuyển gen vào các tế bào vi khuẩn, nấm men… để sản xuất sản phẩm gen theo con đƣờng tái tổ hợp (protein, enzym, vắc xin và các hợp chất có hoạt tính sinh học).