3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.3.2.Phương pháp giám định các đặc tính sinh hoá
Kiểm tra đặc tính sinh hoá của vi khuẩn Salmonella trên môi trường thạch TSI, bằng cách ria cấy trên bề mặt thạch nghiêng và cấy trích sâu một đường xuống đáy ống nghiệm, để tủ ấm 370C trong 24 giờ sau đó xem kết quả: bề mặt ống nghiệm có màu hồng, đường cấy trích sâu có màu đen do sản
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
sinh H2S. Những ống có phản ứng đặc trưng của vi khuẩn Salmonella sẽ được dùng để kiểm tra các phản ứng sinh hoá.
2.3.2.1. Phản ứng chuyển hoá đường: môi trường pepton
+ Thành phần: H2O: 1000 ml; Pepton: 15 g; Andre: 10 ml.
+ Cách pha: trộn đều hỗn hợp trên, đun cho tan hết rồi cho vào mỗi ống 1 ống Ampul. Hấp vô trùng 1210C trong 15 phút, để nguội. Dùng pipet vô trùng nhỏ vào mỗi ống 5-6 giọt đường (mỗi ống 1 loại đường). Kiểm tra vô trùng trong tủ ấm ở 370
C trong 24h. Sau đó nhỏ 5 - 6 giọt canh trùng để tủ ấm 370C trong 24 giờ.
+ Đọc kết quả.
- Nếu vi khuẩn lên men sinh hơi thì đẩy ống Ampul lên.
- Nếu vi khuẩn không lên men đường, môi trường không đổi màu. - Nếu vi khuẩn lên men đường, môi trường đổi màu sang màu đỏ.
2.3.2.2. Phản ứng Indole (dùng thuốc thử Kavac)
+ Phương pháp tiến hành: cấy vi khuẩn vào môi trường nước thịt để ở nhiệt độ 370C trong 24 giờ, sau đó nhỏ từ từ vào thành ống nghiệm 4-5 giọt thuốc thử Kovac.
+ Đọc kết quả: Salmonella phản ứng sinh Indol âm tính nên bề mặt môi trường không có màu đỏ đậm.
2.3.2.3. Phản ứng sinh H2S
+ Phương pháp làm: dùng que cấy đầu nhọn vô trùng lấy vi khuẩn rồi cấy trích sâu vào môi trường TSI agar để tủ ấm 370C trong 24 giờ. Nếu vi khuẩn sinh H2S thì dọc theo đường cấy sẽ xuất hiện màu đen.
2.3.2.3. Phản ứng Catalase và Oxidase
Đây là 2 phản ứng thực hiện đơn giản và nhanh với khuẩn lạc thu được từ thạch đĩa.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Phương pháp tiến hành thử như sau:
Lấy một phiến kính sạch, dùng que cấy cẩn thận lấy một phần của khuẩn lạc đặt lên giữa phiến kính. Nhỏ một giọt hydrogen peroxidaza (H2O2) lên vùng có khuẩn lạc. Phản ứng được cho là dương tính nếu ngay sau khi nhỏ chất phản ứng, bọt khí được hình thành. Ngược lại không có bọt khí hình thành, kết quả âm tính.
+ Phản ứng Oxidase:
Phản ứng này phụ thuộc vào sự có mặt của các men chứa sắt có trong vi khuẩn. Kết quả làm chuyển nhanh tác nhân của phản ứng từ không màu chuyển sang màu tím đậm trong vòng 10 giây. Nếu thời gian chuyển màu dài hơn, kết quả âm tính. Tác nhân của phản ứng có thể làm khô trên một miếng giấy lọc sạch và khuẩn lạc được nhặt ra và phiết lên. Màu tím xuất hiện sau vài giây thực hiện, phản ứng cho kết quả dương tính.