ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.8. Phƣơng pháp xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn phân lập đƣợc
khuẩn phân lập đƣợc
Chúng tôi sử dụng phương pháp kháng sinh đồ trên đĩa thạch theo Nguyễn Thanh Hà (1991), Lê Thị Thiều Hoa (1991), Elizebi J.P (1998)....Dùng mẫu giấy tẩm kháng sinh của hãng OXOID sản xuất với Code 1332E. Áp dụng phương pháp kháng sinh đồ trên đĩa thạch theo Kirby-Bauer, FAO (1994). Đánh giá kết quả theo bảng hướng dẫn của nhà sản xuất.
E. coli được nuôi trong môi trường thạch đĩa Muellier Hinton, C. perfringens được nuôi trong môi trường thạch máu yếm khí (Colombia Blood Agar Base) thực hiện theo các bước dưới đây:
Bước 1: Chuẩn bị môi trường thạch đĩa Muellier Hinton và thạch máu yếm khí.
Bước 2: Các chủng E.Coli được nuôi trong môi trường thạch đĩa Muellier Hinton, C. perfringens được nuôi trong môi trường thạch máu yếm khí được dàn đều trên môi trường nuôi cấy.
Bước 3: Đặt các khoanh giấy tẩm kháng sinh của hãng Oxoid (Anh) ở khoảng cách đều nhau trong đĩa (miếng nọ cách miếng kia 2,5-3 cm).
Bước 4: Các chủng E.Coli được bồi dưỡng ở 370
C/18-24 giờ, còn các chủng C. perfringens được bồi dưỡng ở 370C/24-36 giờ, đo đường kính vòng vô khuẩn để đánh giá mức độ mẫn cảm hay kháng kháng sinh của vi khuẩn.
45
Đường kính của vòng vô khuẩn được tính bằng mm và đo bằng thước kẹp từ phía sau mặt đĩa. Nếu cạnh của vòng vô khuẩn không rõ nét, phải đo khu vực ức chế xấp xỉ 80% vi khuẩn không mọc được.
Kháng sinh Vòng vô khuẩn (đƣờng kính mm)
Kháng Trung bình Mẫn cảm Streptomycin ≤ 11 12-14 ≥ 15 Kanamycin ≤ 12 13-14 ≥ 15 Ampicillin ≤ 11 12-14 ≥ 15 Nofloxacin ≤ 12 15-16 ≥ 17 Amoxicillin ≤ 13 14-17 ≥ 18 Colistin ≤ 14 15-16 ≥ 17 Tetracyclin ≤ 14 15-18 ≥ 19 Oxytetracycline ≤ 14 15-17 ≥ 18 Neomycin ≤ 12 13-14 ≥ 15 Penicilin ≤ 11 12-14 ≥ 15 Enrofloxacin ≤ 16 17-19 ≥ 20
* Đọc kết quả: Kết quả này của các chủng vi khuẩn E.coli và
C.perfringens được đánh giá theo bảng tiêu chuẩn đánh giá kết quả của Hội đồng Quốc gia Hoa Kỳ (1999) [61].