ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.5. Giám định đặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn
Xác định đặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn dựa vào tính chất mọc trên các môi trường nuôi cấy bắt màu thuốc nhuộm, khả năng di động, hình dạng kính thước, lên men đường theo phương pháp thường quy.
* Phản ứng lên men đưòng
Thành phần của dung dịch pepton: Pepton: 15 g Nước cất vô trùng: 1000 ml
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
42
- Cách tiến hành: Trong 100 ml môi trường pepton cho vào 1 ml chỉ thị màu Andrader, lắc đều rồi chia ra các ống nghiệm. Mỗi ống nghiệm có 5 ml, có ống Durham (để kiểm tra sinh hơi của vi khuẩn).
Pha các loại đường Glucoza, Lactoza... thành dung dịch 10%, 20%, hấp ướt 1100
C trong vòng 20-30 phút. Cho vào mỗi ống môi trường nước pepton 5-6 giọt dung dịch đường 10%, 20%. Để tử ấm 370C trong 24 giờ, kiểm tra có tạp khuẩn thì loại bỏ ngay thay thế bằng ống khác. Sau đó cấy vi khuẩn cần giám định vào rồi bồi dưỡng ở nhiệt độ 370C trong 24 giờ.
- Đánh giá kết quả: cùng một lúc kiểm tra được 2 tính chất: * Phản ứng lên men đường:
+ Phản ứng dương tính: Môi trường chuyển màu hồng đỏ + Phản ứng âm tính: Môi trường không chuyển màu * Phản ứng sinh hơi:
+ Phản ứng dương tính: Ống Durham bị đẩy lên và trong ống có một khoảng khí
+ Phản ứng âm tính: Ống Durham vẫn ở đáy ống nghiệm, trong ống không có gì.
* Phản ứng Indol
Nguyên lý: trong môi trường không có đường mà chỉ có pepton, một số vi khuẩn sản sinh men Tryptophataza làm phân giải tryptophan để sinh Indol.
- Cách tiến hành: cấy vi khuẩn vào môi trường nuôi cấy, bồi dưỡng ở tủ ấm 370
C trong 24 giờ, lấy ra rồi nhỏ vào môi trường 5-6 giọt dung dịch Kovac, quan sát trong vòng 1 phút.
+ Phản ứng dương tính: trên bề mặt môi trường xuất hiện một vòng tròn màu đỏ
Tryptophan → Indol
Indol + P.Dimetylaminobenzaldehyt → Rosindol (màu đỏ) + Phản ứng âm tính: Môi trường không chuyển màu
43
* Phản ứng sinh H2S
Phương pháp làm: dùng que cấy đầu nhọn vô trùng lấy vi khuẩn rồi cấy trích sâu vào môi trường TSI agar để ở tủ ấm 370C trong 24 giờ. Nếu vi khuẩn sinh H2S thì dọc đường cấy sẽ xuất hiện màu đen.