2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.5.2.Phương pháp định lượng β-1,3-glucan
Nguyên tắc
β-1,3-glucan là thành phần quan trọng tế bào nấm. Khi nấm được chiết dưới nước nóng hoặc cồn, các phân đoạn polysaccharide theo dung môi chiết ra khỏi
vách tế bào nấm. Dựa vào chất β-1,3-glucan chuẩn mà xác định được lượng β-1,3- glucan có trong dịch chiết.
Phương pháp điện di mao quản-CE-UV (Capillary Electrophoresis –
Ultraviolet) được sử dụng để xác định lượng β-1,3-glucan có trong mẫu. Dựa trên
cơ sở tính chất điện di của các phần tử điện di của các chất phân tích thích hợp
trong mao quản, trên nền của dung dịch chất điện giải và có chất đệm pH thích hợp
dưới tác dụng của một từ trường E nhất định được cung cấp bởi một nguồn điện cao
thế một chiều đặt ở hai đầu mao quản. Dưới tác dụng của điện trường các phân tử chất tan sẽ đi chuyển với tốc độ khác nhau và tách khỏi nhau vì điện tích, kích thước và độ linh động của chúng khác nhau. Ngoài ra, mỗi một chất thì hấp thụ một bước sóng khác nhau, từ sắc ký đồ cho biết chất cần nhận biết có ở trong mẫu hay
khơng. Sự tương quan nồng độ giữa mẫu và chất chuẩn sẽ cho biết được nồng độ chất cần phát hiện.
Hóa chất và thiết bị
Vật liệu và phương pháp
Nguyễn Thị Thu Trang 39
- Sinh khối hai lồi nấm vân chi ni trên mơi trường PGAY - β-1,3-glucan chuẩn, trọng lượng 500000 Da (Sigma, USA)
Thiết bị
- Tủ sấy
- Rây có đường kính lỗ 0,8 mm Phương pháp tiến hành
Chuẩn bị dịch phân đoạn polysaccharide:
Quả thể hai loài nấm vân chi được trồng, cắt lát, sấy khô ở 400C trong 12 giờ
(độ ẩm khoảng 6-9%), nghiền, rây qua rây 0,8 mm. Cân chính xác 1,0 g mẫu cho
vào Erlen 250 ml với 100 ml nước cất. Đun cách thủy trong 1 giờ, lọc nóng [51]. Tồn bộ dịch nổi thu được, cùng với β-1,3-glucan chuẩn gửi đi phân tích
bằng phương pháp CE-UV.