Việc phân tích sơ bộ thành phần hóa học dựa vào quy trình [2]:
Cho 10 g bột dược liệu vào Erlen 50 ml, lắc với 30 ml dietyl eter trong 5 phút. Làm như vậy đến khi dung dịch eter không còn màu. Chuyển dịch qua một bình lắng, lắc với 60 ml KOH 10% (20 ml x 3 lần) sẽ tách thành hai lớp: lớp kiềm và eter.
Phân tích dung dịch kiềm
Dung dịch kiềm được cho vào becher và trung hòa bằng dung dịch HCl 25%
đến trung tính, đem lọc. Tủa trên phiễu lọc hòa với 5 ml cồn 960, chia làm 3 ống nghiệm.
Ống nghiệm Thuốc thử Phản ứng dương
tính ( +) Kết luận
1 Nhỏ vài giọt KOH
10% Màu đỏ Anthraglycosid
2 Acid hóa với HClđđ
và bột Mg kim loại Màu đỏ Flavonoid
3 Nhỏ một giọt vào giấy lọc, hơ khô
Trên giấy lọc để lại
vết mờ Acid béo
Phân tích dung dịch eter
Lớp dung dịch eter được rửa 3 lần với nước cất (20 ml x 3 lần), sau đó lắc 3 lần với dung dịch H2SO4 2% (5 ml x 3 lần). Các dịch acid được gom lại để làm phản ứng định tính alkaloid.
Vật liệu và phương pháp
Nguyễn Thị Thu Trang 35 Thuốc thử Mayer Kết tủa vàng nhạt
Alkaloid Thuốc thử Dragendorff Kết tủa vàng cam
Thuốc thử Bouchardat
(Wagner) Kết tủa nâu
Dịch eter được chia làm 3 phần cho vào 3 chén sứ bốc hơi cạn.
Chén thí nghiệm Thuốc thử Phản ứng + Kết luận
1 Không Có mùi thơm Tinh dầu
2 Nhỏ vài giọt
H2SO4đđ Màu xanh Carotenoid
3 Hòa cặn với giọt anhydric acetic, nhỏ từ từ H2SO4đđ theo thành ống Chỗ giáp giới có màu vàng lục hay lục đỏ Phytosterol
Bã dược liệu sau khi chiết bằng eter đem chiết nóng với cồn 900 (30 ml x 3 lần) trên bếp cách thủy, lọc. Chuyển dịch lọc vào bình nón, chia làm 6 phần:
Phần thứ 1: pha loãng với 4 thểtích nước cất, base hóa với dung dịch NH4OH 10%, lọc. Ống nghiệm Thuốc thử Phản ứng + Kết luận 1. Tủa trên phễu lọc Thêm 1 ml CHCl3 + 1 ml anhydric acetic + vài giọt H2SO4đđ
Màu xanh Steroid
2. Dịch lọc đem acid hóa bằng HCl, thu tủa.
Tủa hòa với 3-4 ml cồn 900, chia làm hai ống nghiệm.
Ống 1 Thêm vài giọt
Vật liệu và phương pháp
Nguyễn Thị Thu Trang 36
Ống 2 Thêm vài giọt HClđđ, sau đó cho vào một ít Mg kim loại Màu đỏ Flavonoid
Phần thứ 2: pha loãng dịch cồn với 1 thể tích nước cất rồi chia làm 2 phần. Ống nghiệm Thuốc thử Phản ứng + Kết luận 1 Trung hòa bằng Natri acetate + dung dịch FeCl3 2%
Màu xanh đen Tanin
2 Cho vào vài tinh
thể Na2CO3 Sủi bọt Acid hữu cơ
Phần thứ 3: dịch cồn được bốc hơi cách thủy trong chén sứđến cạn. Hòa cặn với 4-5 ml H2SO4 2%, lọc. Chia dịch lọc ra làm 3 phần để thực hiện phản
ứng định tính alkaloid.
Phương pháp thử Phản ứng + Kết luận
Thuốc thử Mayer Kết tủa vàng nhạt
Alkaloid Thuốc thử Dragendorff Kết tủa vàng cam
Thuốc thử Bouchardat
(Wagner) Kết tủa nâu
Phần thứ 4: bốc hơi dịch cồn trong chén sứ tới cạn, hòa cặn với 3 ml
nước cất đun nóng. Lọc, cho thêm vào nước lọc 4-5 giọt thuốc thử Fehling A và 4-5 giọt thuốc thửFehling B. Đun cách thủy, nếu có kết tủa đỏ gạch- đường khử.
Phần thứ 5: dịch cồn được pha loãng với thểtích nước cất, chia làm 2
Vật liệu và phương pháp
Nguyễn Thị Thu Trang 37
Ống nghiệm Thuốc thử Phản ứng + Kết luận
1 Thêm vài giọt HCl Màu đỏ
Anthocyanosid 2 Kiềm hóa Màu lục
Phần thứ 6: chia dịch cồn làm 2 phần, bốc hơi cách thủy trong chén sứ. Chén sứ Thuốc thử Phản ứng + Kết luận 1 Thêm 5 ml nước cất Lắc mạnh có bọt bền Saponin 2 Hòa vào chén 0,5 ml CHCl3 + 0,5 ml ahydic acetic + vài giọt H2SO4đđ
Có vòng tím Saponin Triterpeniod Có vòng xanh lục Steroid saponin
Bã dược liệu sau khi chiết cồn 900được chiết với H2SO4 2% (20 ml x 3 lần). Lọc rồi chia nước lọc thành 5 phần.
Ống nghiệm Thuốc thử Phản ứng + Kết luận
1 Lắc trong ống nghiệm Có bọt bền Saponin
2
Kiềm hóa với NH4OH 10%, lắc với eter (5 ml x 3 lần). Loại bỏ lớp nước, lớp eter lắc với H2SO4 2%. Dịch acid được chia làm 3 phần để làm phản ứng định tính alkaloid Alkaloid Thuốc thử Mayer Kết tủa vàng nhạt Thuốc thử Dragendorff Kết tủa vàng cam
Vật liệu và phương pháp
Nguyễn Thị Thu Trang 38 (Wagner)
3 Tác dụng với thuốc
thử Fehling Tủa đỏ gạch Đường khử
4
Trung tính hòa với
Natri acetate, sau đó
cho thêm dung dịch FeCl3 10%
Có màu xanh Tanin
5 Pha dịch với 2 thể
tích cồn Có tủa nhiều Hợp chất Uronic