CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4. NHẬN BIẾT PEAK LUTEIN VÀ LUTEIN ESTER
Kết quả HPLC cho thấy oleoresin chiết từ mẫu hoa cúc vạn thọ nghiên cứu là hỗn hợp chứa chủ yếu các dạng ester khác nhau của lutein, trong đó hàm lượng lutein tự do trong mẫu oleorsin không phát hiện được (Hình 3.11). Sau q trình xà phịng hóa ở điều kiện khảo sát (700C; 3 h), sắc ký đồ HPLC (Hình 3.12; Hình 3.13) và phổ hấp thụ UV-Vis của các peak trên sắc ký đồ (Hình 3.44) cho thấy ngồi sự hình thành lutein tự do ở dạng trans có RT ~ 8,9 phút luôn luôn tạo thành đồng phân cis-lutein (RT ~ 10,3 min).
Hình 3.11. Sắc ký đồ HPLC của mẫu oleoresin khơng xà phịng hóa (lutein
ester) ứng với nồng độ oleoresin 0,2 g/ml
Hình 3.13. Sắc ký đồ mẫu lutein đối chứng cho thấy trans-lutein có RT ~ 8,9
phút
a) trans-lutein: b) cis-lutein:
lmax = 328; 418; 442; 468 nm lmax = 424; 446; 474 (nm)
Hình 3.14. Phổ hấp thụ UV-Vis ứng với: a) peak trans-lutein (RT ~ 8,9 min);
b) peak cis-lutein (RT ~ 10,3 min)
Các sắc ký đồ HPLC thu được (Hình 3.12) cho thấy với cột HPLC đang sử dụng (cột C18 kích thước 250 mm x 4,6 mm; cỡ hạt 5µm) khơng phát hiện được peak của zeaxanthin. Kết quả nghiên cứu của Hoàng Thị Huệ An (2009) [13] cũng chứng tỏ cột C18 cỡ hạt 5 µm khơng có khả năng phân giải cặp đồng phân lutein/zeaxanthin. Để phân giải cặp đồng phân này cần dùng các cột C18 có cỡ hạt nhỏ hơn (cỡ 3 µm), hoặc dùng cột có pha tĩnh tương tác với lutein và zeaxanthin chọn lọc hơn (như cột C30 hoặc cột silica). Do các cột HPLC nói trên khơng được sử dụng phổ biến ở nước ta nên trong nghiên cứu này chỉ đánh giá hàm lượng zeaxanthin qua hàm lượng lutein tổng cộng.