CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.2. TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP HPLC
1.2.3.1. Thờigian lư u Thờigian lưu thực
Thời gian lưu của một chất (ký hiệu tr) là thời gian tính từ khi bơm mẫu vào cột cho đến khi chất đó ra khỏi cột đạt giá trị cực đại.
Thời gian lưu phụ thuộc vào các yếu tố: - Bản chất phân tử của chất tan.
- Điều kiện chạy sắc ký: bản chất pha tĩnh; bản chất, thành phần, pH và tốc độ của pha động; nhiệt độ cột.
Để đánh giá thời gian lưu thực của một cấu tử trong pha tĩnh cần phải dùng thời gian lưu thực (ký hiệu: tr’):
tr’ = tr – t0 trong đó:
t0: là thời gian cần thiết để pha động (hay một cấu từ hồn tồn khơng bị lưu giữ) đi từ đầu cột đến detector
Trên cùng một điều kiện sắc ký đã chọn thì thời gian lưu thực của mỗi chất là hằng định và các chất khác nhau sẽ có thời gian lưu khác nhau. Vì vậy, dựa vào thời gian lưu để nhận biết sự có mặt của các chất.
Trong một phép phân tích nếu t’r nhỏ quá thì sự tách kém, cịn nếu t’r quá lớn thì peak bị dỗng và độ lặp lại của peak rất kém, thời gian phân tích rất dài đồng thời kéo theo nhiều vấn đề khác như hao tốn dung mơi, hóa chất, độ chính xác của phép phân tích kém.
Hình 1.6 là sắc ký đồ khi rửa giải của 2 chất A và chất B. Chất A được rửa giải ra trước với thời gian lưu trA ; chất B được rửa giải ra sau với thời gian trB.
Hình 1.6. Sắc ký đồ của hỗn hợp 2 cấu tử A và B [16]
Trong đó:
t0: thời gian lưu chết
trA: thời gian lưu chất A t’rA : thời gian lưu thực chất A
trB: thời gian lưu chất B t’rB: thời gian lưu thực chất B