CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1.1. Chuẩn bị các dung dịch khảo sát điều kiện chạy HPLC
a) Chuẩn bị dung dịch lutein đối chứng :
Cân khoảng 2 mg mẫu lutein đối chứng cho vào cốc 25 mL, thêm một vài giọt dichloromethane cho tan rồi thêm tiếp acetone HPLC và chuyển vào bình định mức 100 mL, định mức tới vạch bằng acetone, lắc đều. Bảo quản dung dịch trên trong tối ở -200C. Ngay trước khi dùng, đưa dung dịch về nhiệt độ phịng, pha lỗng 10 lần bằng acetone HPLC, lọc qua màng lọc 0,45 µm rồi bơm vào thiết bị HPLC.
b) Chuẩn bị dung dịch lutein ester:
* Bước 1: Thu nhận lutein oleoresin từ bột hoa cúc vạn thọ khô:
Cân 1,0 kg bột hoa cúc vạn thọ khô cho vào nồi chiết của thiết bị chiết hồi lưu gia nhiệt có cánh khuấy. Thêm vào đó 15 L hexane, khuấy trộn và đun nóng ở trong 24 giờ để chiết carotenoid. Lọc lấy dịch chiết. Lặp lại q trình chiết nói trên với bã chiết. Gộp dịch chiết hexane lại, cô dưới áp suất thấp (<400C), thu được một dạng dầu sệt màu nâu đỏ (còn gọi là lutein oleoresin, chứa các carotenoid - chủ yếu dưới dạng lutein ester). Bảo quản lutein
* Bước 2: Chuẩn bị dung dịch lutein ester:
Cân khoảng 0,05 gam lutein oleoresin hòa tan và định mức thành 100 ml bằng acetone HPLC. Bảo quản dung dịch trên trong tối ở -200C (thời gian bảo quản không quá 1 tháng). Ngay trước khi dùng, đưa dung dịch về nhiệt độ phịng, pha lỗng 10 lần bằng acetone HPLC.
c) Chuẩn bị dung dịch hỗn hợp lutein và lutein ester :
Ngay trước khi phân tích, hút 5mL dung dịch lutein đối chứng cho vào bình định mức 10 ml chứa sẵn 5 mL dung dịch lutein ester. Đậy nắp, lắc đều. Hút 1 ml dung dịch thu được, lọc qua màng lọc 0,45 µm rồi bơm vào thiết bị HPLC.