DNA trong hệ gen của RLB được chiết xuất để làm nguyên liệu cho giải trình tự gen và làm khuôn cho phản ứng PCR nhân đoạn gen cần nghiên cứu. DNA được tách theo kit Genomic DNA Purification Kit của hãng Fermentas. Trình tự tiến hành
Mẫu máu tôm Spin 5 phút để thu dịch Nuôi trong L-15 Ly tâm bỏ tủa Tách DNA tổng số Mẫu TH39
như sau (theo quy trình chỉ dẫn của hãng):
- Lấy mẫu vào ống eppendorf và nghiền kỹ bằng chày nghiền.
- Thêm 200 µl TE 1X, tiếp tục nghiền sau đó trộn đều, tránh tạo bọt.
- Thêm 400 µl dung dịch Lysis và ủ ở 65 0C trong 10 phút.
- Thêm 600 µl dung dịch chloroform vào ống đã ủ, lắc nhẹ vài lần. Ly tâm 10.000 vòng/phút trong 3 phút.
- Hút toàn bộ dịch trên sang ống mới và thêm 800 µl dung dịch tủa DNA (720 µl dung dịch H2O khử ion + 80 µl dung dịch Supplied 10X). Để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.
- Ly tâm, loại dịch nổi. Hoà tủa DNA trong 100 µl dung dịch NaCl 1,2 M. Thêm 2 µl RNAse 10 mg/ml, ủ 370C trong 1 giờ.
- Thêm 300 µl cồn tuyệt đối vào ống và để -20 0C trong 3 giờ hoặc qua đêm.
- Ly tâm 12.000 vòng/phút trong 15 phút, thu tủa. Rửa tủa hai lần bằng cồn 700:
+ Thêm 500 µl cồn 700, trộn đều
+ Ly tâm 12.000 vòng/phút trong 5 phút
+ Làm khô DNA bằng máy hút chân không hoặc làm khô tự nhiên trong bốc sạch.
- Hoà tủa DNA trong 30-100 µl TE 1X, kiểm tra độ sạch và xác định hàm lượng DNA bằng đo quang phổ hấp thụ ở bước sóng 280 nm và 260 nm và điện di trên gel agarose 1%.