Quy trình nhân nuơi virút dengue ở quy mơ phịng thí nghiệm

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) xây dựng qui trình nhân nuôi và tinh chế virút dengue sử dụng trong sản xuất vắc xin sống giảm độc lực (Trang 70 - 72)

1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

3.1 Xây dựng quy trình nhân nuơi virút dengue ở quy mơ phịng thí nghiệm

3.1.3 Quy trình nhân nuơi virút dengue ở quy mơ phịng thí nghiệm

Dựa trên kết quả khảo sát liều gây nhiễm, thời gian hấp phụ, thời gian nuơi cấy virút và số lượng các mẻ gặt cần thiết, chúng tơi xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất chủng virút gốc giống cho sản xuất vắc xin dengue như sau:

Hình 3.8. Sơ đồ tĩm tắt quy trình nhân nuơi virút dengue

Để đảm bảo yêu cầu sử dụng cho sản xuất vắc xin, hỗn dịch nước nổi virút sau thu hoạch phải đảm bảo khơng tạp nhiễm vi khuẩn, nấm, mycoplasma, mycobacteria hoặc nhiễm chéo các chủng virút dengue khác. Do đĩ tất cả các bước trong quy trình nuơi cấy tế bào, virút đều được tiến hành trong khu vực kiểm sốt (class C) và trong các tủ an tồn sinh học (class A) đảm bảo vơ trùng, được kiểm tra và thẩm định

Thu hoạch các chủng virus dengue

Thu hoạch nước nổi và bổ sung mơi trường LH3E mới và tiếp tục nuơi cấy. Các mẻ gặt sau cách nhau 3 ngày.

Ủ các chai trong tủ ấm

Nhiệt độ 37± 0.5oC; 5 ± 0.5% CO2 trong 7 ngày

Bổ sung mơi trường nuơi cấy khơng huyết thanh

Mơi trường LH3E 0,33ml/cm2

Gây nhiễm virus dengue

Liều gây nhiễm MOI = 0.01; thời gian hấp phụ 1 giờ

thường xuyên bởi phịng quản lý chất lượng. Nước nổi sau thu hoạch của tất cả các mẻ gặt đều được lưu mẫu và tiến hành kiểm tra vơ khuẩn (xem phần 2.2.10). Ngồi ra, dựa trên cơng thức pha dự kiến cho các chủng dengue từ 103 – 104 PFU/ml, và để thuận lợi cho qui trình tinh chế virút sau này, hiệu giá virút của tất cả các chủng, và các mẻ gặt phải đạt trên 106 PFU/ml. Kết quả kiểm tra chất lượng các mẻ gặt của các chủng virút dengue được tổng hợp theo bảng dưới đây:

Bảng 3.1. Kết quả kiểm tra chất lượng các mẻ gặt đơn virút dengue

Chủng virút

Mẻ gặt

Hiệu giá virút (Log PFU/ml) Thử nghiệm vơ khuẩn

Kết luận

Tiêu chuẩn cơ sở Kết quả

rDEN 1 H1 6.0 7.42 Đạt Đạt H2 6.0 7.12 Đạt Đạt H3 6.0 6.65 Đạt Đạt rDEN 2 H1 6.0 7.24 Đạt Đạt H2 6.0 7.15 Đạt Đạt H3 6.0 6.73 Đạt Đạt rDEN 3 H1 6.0 6.65 Đạt Đạt H2 6.0 6.70 Đạt Đạt H3 6.0 6.31 Đạt Đạt rDEN 4 H1 6.0 8.09 Đạt Đạt H2 6.0 8.12 Đạt Đạt

Đối với qui trình sản xuất trên đây, qui mơ cĩ thể mở rộng bằng cách tăng số lượng tầng trên chai nuơi, hoặc tăng số lượng chai nhiều tầng để đảm bảo lượng virút cần thiết theo yêu cầu trong 1 loạt sản xuất mà khơng cần phải thay đổi nền tảng nuơi cấy tế bào hoặc thay đổi qui trình sản xuất.

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) xây dựng qui trình nhân nuôi và tinh chế virút dengue sử dụng trong sản xuất vắc xin sống giảm độc lực (Trang 70 - 72)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(96 trang)