CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.3. Hệ thống nấm men Pichia pastoris biểu hiện protein ngoại lai
1.3.2. Vector pPICZα biểu hiện protein ở P pastoris
pPICZα là hệ vector biểu hiện có kích thước khoảng 3,6 kb, cho phép biểu hiện mức độ cao protein ngoại lai trong hệ P. pastoris ở một số chủng như SMD1168H, X33, KM71H. Vector pPICZα có chứa các yếu tố cần thiết bao gồm: promoter AOX1 hoạt động mạnh điều khiển biểu hiện protein mong muốn thông qua cảm ứng methanol, tín hiệu tiết α-factor điều khiển biểu hiện tiết protein tái tổ hợp, gen kháng zeocin giúp sàng lọc các thể mang vector ở cả E. coli và P. pastoris, và nhiều đặc điểm khác tạo thuận lợi
(Hình 1.3) [42, 57]. Trên vector pPICZα, gen ngoại lai được chèn vào vị trí đa điểm nên đầu N của protein ngoại lai được gắn với trình tự tín hiệu tiết α-factor, đầu C của protein được gắn với c-myc epitope và polyhistidine. Sự phiên mã của gen được điều khiển bởi promoter AOX1. Do đó, khi gen aox1 được kích hoạt sẽ tổng hợp cả trình tự tín hiệu tiết α-factor, protein đích, c-myc epitope và polyhistidine. Việc gắn gen đích vào vị trí sau trình tự tín hiệu tiết giúp protein mong muốn được tiết ra ngoại bào khi biểu hiện trong
P. pastoris. Sau quá trình biểu hiện, trình tự tín hiệu tiết này bị cắt khỏi chuỗi
polypeptide. Quá trình phân cắt xảy ra theo 2 bước: đầu tiên là cắt sơ bợ trình tự tín hiệu bởi sản phẩm của gen kex2, xảy ra giữa arginine và glutamine trong trình tự Glu-Lys-
Arg*Glu-Ala-Glu-Ala; tiếp đó, trình tự lặp lại Glu-Ala sẽ bị cắt bởi sản phẩm của gen
ste13. Vì vậy, sản phẩm protein ngoại lai có gắn thêm mợt đoạn trình tự ở sau vị trí cắt
tín hiệu tiết α-factor và gắn thêm đuôi c-myc epitope và polyhistidine [57].
Hình 1.3. Vector biểu hiện pPICZα [56].