Chú thích: Giếng X33*: chủng X33 biến nạp pPICZαA (đối chứng); giếng 17-36: các chủng
X33 tương ứng từ 17-36 chứa vector tái tổ hợp pPICZαA-TAT-p53-His.
Kết quả điện di ở hình 3.8 cho thấy ở tất cả các chủng khảo nghiệm thì đều có xuất hiện xuất hiện mợt băng kích thước khoảng 47 kDa (Giếng 17-36, Hình 3.8), tương đương với kích thước của protein p53 tái tổ hợp đã thiết kế (bao gồm 43,7 kDa là kích thước thật của p53, và 3,3 kDa của đầu TAT và đuôi 6X Histidine), đồng thời băng này không xuất hiện ở chủng P. pastoris X33/pPICZαA (Giếng X33*, Hình 3.8). Ngồi ra, ở chủng X33-36 có xuất hiện thêm mợt băng protein khá đậm có kích thước khoảng 57 kDa. Tham khảo các báo cáo biểu hiện p53 từ các nhóm nghiên cứu trước đây, đặc biệt là kết quả của nhóm Salma Abdelmoula-Souissi (2012) [2], chúng tôi nhận định đây
cũng là băng protein p53 tái tổ hợp có chứa thêm đầu α-peptide (gồm 10 amino acid) chưa được cắt bỏ (có khối lượng khoảng 10 kDa). Như vậy, chúng tơi kết luận đã có thể biểu hiện được protein p53 tái tổ hợp trong P. pastoris X33 và lựa chọn chủng X33-36 là chủng biểu hiện chính, sử dụng cho các thí nghiệm khảo sát điều kiện tối ưu khác.
3.2.2. Tối ưu môi trường biểu hiện p53 tái tổ hợp
Để khảo sát mức độ biểu hiện protein p53 tái tổ hợp trên các môi trường khác nhau, chúng tôi chọn chủng P. pastoris X33-36 tái tổ hợp đã được kiểm tra có chứa gen
TAT-p53-His và có sức sinh trưởng tốt để nuôi biểu hiện trong năm môi trường khác
nhau là BMMY, YPM, YPDM, BMM và MMY (Mục 2.2.8.2). Q trình ni biểu hiện trên năm mơi trường này đều được cảm ứng bằng 0,5% methanol sau mỗi 24 giờ nuôi cấy và đo OD600 nm. Sau 72 giờ cảm ứng, dịch nổi được thu nhờ ly tâm 3.000 vòng/phút trong 10 phút, tủa bằng aceton 100% với tỉ lệ 1:3, sau đó tủa được hịa tan bằng nước và điện di biến tính trên gel polyacrylamide 12% để đánh giá kết quả.