Virus RR đư phát hiện bằng phản ứng R - CR với độ dài ủa g n là 392bp, thang huẩn M 100bp; giếng t 1-10 là mẫu t 5 l n bệnh; giếng 11
Kết quả của phản ứng RT-PCR đã giúp chúng tơi chẩn đốn được những con lợn ốm có mang virus PRRS. Khi sử dụng phương pháp RT-PCR để nghiên cứu PRRS, tác giả Nguyễn Ngọc Hải và cs, (2007) đã kết luận: RT- PCR là phương pháp chẩn đốn có độ tin cậy cao, có thể n tâm sử dụng để chẩn đốn PRRSV.
3.4.2. Chẩn đốn PRRS bằng phương pháp ni cấy phân lập virus trên môi trường tế bào Marc-145
Chúng tôi cũng tiến hành lấy bệnh phẩm là ph i và hạch ph i của 5 lợn mắc PRRS (đã có kết quả dương tính khi thực hiện phản ứng RT- PCR), k hiệu là TNPL1, TNPL2, TNPL3, TNPL4, TNPL . Lấy bệnh phẩm từ các lợn này để nuôi cấy phân lập virus trên môi trường tế bào Marc- 14 , có sự so sánh v i đối chứng dương là virus vaccine và đối chứng âm là môi trường. Sau các khoảng thời gian 24h, 36h,…72h kiểm tra bệnh tích tế bào (CPE); mức độ bệnh tích tế bào được xác định dựa trên tỷ lệ giữa diện tích vùng tế bào bị phá hủy v i tồn bộ diện tích bề mặt ni cấy. Kết quả nghiên cứu được trình bày bảng 3.31.
Bảng 3.31. Kết quả phân lập PRRSV trên môi trường tế bào Marc-145 ( ính th % diện tí h bệnh tí h tế bà s với t ng số diện tí h đáy bình
TT Nhóm lợn Bệnh phẩm CPE Tỷ lệ sau 72 giờ nuôi cấy
12h 24h 36h 48h 60h 1 TNPL1 Ph i - 30% 70% 100% 100% Hạch ph i - 25% 60% 80% 100% 100% 2 TNPL2 Ph i - 40% 75% 100% 100% Hạch ph i - 50% 100% 100% 3 TNPL3 Ph i 25% 55% 80% 100% Hạch ph i 30% 70% 90% 100% 4 TNPL4 Ph i 35% 80% 90% 100% Hạch ph i 100% 5 TNPL5 Ph i - 30% 60% 100% 100% Hạch ph i - 35% 70% 100% 100% 6 ĐC (+) Virus vắcxin - 40% 90% ** 100% 7 ĐC (-) Môi trường - - - - - 0
Chú thích: (**) - Tế bà b ng khỏi bề mặt giếng ni ấy
CPE TRÊN MƠI TRƯỜNG TẾ BÀO MARC-145
Hình 3.49. Đối chứng (-) Hình 3.50. Đối chứng (+)