1. .2 Khuyến cỏo cụng tỏc phũng, chống dịch PRRS tại Việt Nam
1.6.1. Phỏt hiện virus
Để phỏt hiện virus, lấy bệnh phẩm là huyết thanh, huyết tương, ph i, hạch ph i, t chức lympho, dịch của thai chết lưu hoặc lợn chết ngay sau khi sinh.
Nhiều tỏc giả cho rằng bệnh phẩm lợn con thớch hợp hơn bệnh phẩm lợn trư ng thành vỡ virus gõy hội chứng PRRS tồn tại trong một thời gian dài lợn con.
Cú thể phõn lập được virus huyết thanh trong vũng 4 - 6 tu n sau khi bị nhiễm lợn đang bỳ, lợn cai sữa và lợn choai; và trong vũng 1- 2 tu n sau khi nhiễm lợn đực trư ng thành và lợn nỏi. C n phải bảo quản lạnh ngay lập tức bệnh phẩm dựng để phỏt hiện virus (Lờ Văn Lónh, 2007).
Cú thể ỏp d ng một số kỹ thuật sau đõy để phỏt hiện virus:
- Phõn lập virus trờn một số loại tế bào: Tế bào phế nang của lợn, tế bào MA-104, tế bào MARC-145, CL2621 và CL-11171.
- Phương phỏp bệnh lớ miễn dịch.
- Phương phỏp huỳnh quang giỏn tiếp phỏt hiện khỏng nguyờn. - Phương phỏp nhõn gen (PCR).
- Phương phỏp lai phõn tử tại chỗ (insitu hybridization).
Trong thực tế, vấn đề phõn lập virus cũn gặp nhiều khú khăn, b i vỡ tế bào dựng để phõn lập virus là tế bào đại thực bào của lợn và đũi hỏi phải lấy lợn vụ trựng (SPF) lứa tu i 6-8 tu n. Lợn vụ trựng là lợn được nuụi từ sơ sinh trong điều kiện vụ trựng, khụng được sử dụng bất cứ một loại vaccine nào và cũng hoàn toàn khụng cú bệnh. Khụng phải tất cả cỏc phũng thớ nghiệm chẩn đoỏn đều chuẩn bị được mụi trường tế bào đại thực bào đạt tiờu chuẩn như vậy.
Cỏc tế bào khỏc tỏ ra khụng mẫn cảm v i virus PRRS và khụng thể thay thế được mụi trường tế bào đại thực bào.
Sau khi phõn lập được virus, cú thể giỏm định bằng phương phỏp nhuộm húa miễn dịch tế bào (HMDTB).
1.6.2. Ch n đoỏn huyết thanh học
Cú thể phỏt hiện khỏng thể khỏng virus PRRS trong huyết thanh, dịch của cơ thể hoặc từ thai chết lưu bằng một số phương phỏp huyết thanh học bao gồm phương phỏp khỏng thể huỳnh quang giỏn tiếp, phương phỏp miễn dịch enzym trờn thảm tế bào một l p, ELISA và phản ứng trung hũa huyết thanh.
Trong cỏc phương phỏp kể trờn, ELISA là phương phỏp tiện lợi hơn cả. Thuận lợi của phương phỏp này là cú thể chẩn đoỏn một số lượng l n huyết thanh và cỏc kết quả thu được của cỏc phũng thớ nghiệm (khi chẩn đoỏn cựng cỏc huyết thanh) là tương đối đồng nhất.
Một ưu điểm nữa của phương phỏp này này là cú thể phỏt hiện được cả chủng virus gõy hội chứng PRRS cú nguồn gốc chõu Mỹ và cỏc chủng cú nguồn gốc chõu Âu, trong khi đú phương phỏp huỳnh quang khỏng thể hoặc phương phỏp miễn dịch enzym trờn thảm tế bào ch phỏt hiện được cỏc chủng virus về mặt khỏng nguyờn g n v i chủng dựng trong phản ứng.
Rừ ràng là trong khi đỏnh giỏ kết quả của một phản ứng huyết thanh, phải cõn nhắc đến trạng thỏi miễn dịch của đàn sau khi được tiờm phũng, b i vỡ hiện nay chưa cú phản ứng huyết thanh học nào phõn biệt được khỏng thể do lợn mắc bệnh tự nhiờn hay khỏng thể do vaccine kớch thớch tạo nờn.
Động thỏi khỏng thể khỏng virus gõy hội chứng PRRS khi đỏnh giỏ bằng cỏc phản ứng huyết thanh học kể trờn là tương tự như nhau. Cú thể phỏt hiện khỏng thể từ 7- 14 ngày sau khi lợn bị nhiễm virus. Hàm lượng khỏng thể đạt mức tối đa vào 21-49 ngày sau khi nhiễm sau đú giảm d n và khụng phỏt hiện được nữa khoảng 4-6 thỏng sau khi bị nhiễm.
Phản ứng trung hũa huyết thanh cú lẽ kộm nhạy hơn cỏc phản ứng huyết thanh học khỏc vỡ khỏng thể trung hũa xuất hiện chậm hơn. Tuy nhiờn phản ứng trung hũa lại là ch thị tốt nhất để đỏnh giỏ tỡnh trạng bệnh trong quỏ khứ vỡ khỏng thể trung hũa cú thể tồn tại tương đối lõu trong cơ thể lợn.
Phỏt hiện khỏng thể
Cú 4 test được dựng để phỏt hiện khỏng thể virus PRRS trong huyết thanh: + Immunoperoxidase monolayer assay (IPMA).
+ Phản ứng khỏng thể huỳnh quang giỏn tiếp - Indirect fluorescent antibody test (IFA).
+ Phản ứng trung hũa huyết thanh – Serum Neutralize (SN). + Enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA).
- IPMA là phản ứng sử dụng đ u tiờn để phỏt hiện khỏng thể PRRS và nú vẫn cũn được dựng ph biến nhất Chõu Âu. IPMA cú thể thực hiện v i PAM, CL 2621 hoặc MAC 104. Dựng phỏt hiện khỏng thể s m 6 ngày sau khi nhiễm thực nghiệm. Phản ứng này hỡnh như rất đặc hiệu dựa trờn kết quả của huyết thanh dương tớnh đó biết, nhưng độ nhạy trờn từng cỏ thể là nghi ngờ. Trong nghiờn cứu thực tế, Wensvoort, (1991) và cộng sự đó phỏt hiện khỏng
thể PRRS 123 trong số 16 con lợn nỏi đó thử nghiệm từ những trường hợp thể hiện lõm sàng. Đ u tiờn IPMA được dựng chủ yếu mụi trường nuụi cấy PAM. Nuụi cấy ban đ u khụng dễ gỡ thu được kết quả và phải được thử nghiệm đối v i cỏc tỏc nhõn ngoại lai. Cú thể khắc phục bằng sử dụng tế bào liờn lạc CL2621. Tuy nhiờn, vỡ phản ứng ch tin cậy trờn từng đối tượng và khụng thể tự động được nờn nú khụng phải là phản ứng để làm thường ngày trờn quy mụ l n.
- Phản ứng IFA, l n đ u tiờn được bỏo cỏo b i Yoon và cộng sự, giống như IPMA và được dựng nhiều Mỹ, IFA so sỏnh tượng tự v i IPMA về độ đặc hiệu và độ nhạy. Trong nghiờn cứu của Yoon, (1994), quan sỏt cỏc mẫu huyết thanh đó thử nghiệm õm tớnh trong đàn mắc lõm sàng, cú t i 75% mẫu huyết thanh dương tớnh b i IFA. Phản ứng IFA được hỡnh thành cú nguồn gốc từ PAM nhưng đó được thớch nghi một cỏch thoả món đối v i tế bào CL 2621. Những vấn đề tương tự ảnh hư ng t i phản ứng IFA, người ta phải xỏc định kết quả bằng mắt thường và phản ứng khụng được làm tự động vỡ vậy khú mà thực hiện v i quy mụ l n.
- Phản ứng trung hũa (SN) để phỏt hiện khỏng thể chống virus trong huyết thanh cũng được phỏt triển. Hiện nay phản ứng trung hoà khụng thể thực hiện trong PAM vỡ virus khụng được trung hũa. Phản ứng trung hũa tiến hành v i CL 2621 trong phương phỏp chuẩn, khỏng thể SN phỏt triển chậm hơn so v i khỏng thể IFA và phản ứng trung hoà được coi như là kộm nhậy hơn sau khi nhiễm cấp tớnh. Sử dụng SN trong đàn đó trải qua nhiễm nguyờn phỏt 6 thỏng trư c đú cú thể cú lợi nhưng vỡ SN ớt nhậy hơn trong nhiễm cấp tớnh, trải qua nhiều bư c nờn đến nay nú ch được gi i hạn sử dụng trong phũng thớ nghiệm nghiờn cứu.
- Albina, (1994) và cộng sự đó phỏt triển phương phỏp ELISA để phỏt hiện khỏng thể chống virus PRRS. Khỏng nguyờn chế b i mụi trường nuụi cấy
PAM gõy nhiễm virus và khỏng nguyờn õm tớnh được chế bằng cỏch tương tự. Một mẫu coi như dương tớnh khi tỷ lệ mật độ quang học giữa khỏng nguyờn dương tớnh trờn khỏng nguyờn õm tớnh thay đ i rừ, tỷ lệ đú l n hơn 1,5.
Albina và cộng sự đó bỏo cỏo ELISA cú độ đặc hiệu như IPMA và nhậy hơn đặc biệt là cỏc xột nghiệm đ u dịch.
Tuy nhiờn Ed ards và cộng sự lại cho rằng ELISA ớt nhậy hơn so v i IPMA và nhận thấy rằng ELISA cho kết quả thực tế khụng thể chấp nhận được một vài lợn nỏi õm tớnh.
Nếu ELISA cú thể tin cậy, nú sẽ được dựng rộng rói vỡ nú cú thể làm tự động và thực hiện trờn quy mụ l n một cỏch kinh tế.
Phỏt hiện khỏng nguyờn
Virus được phõn lập hằng ngày 2 hệ thống nuụi cấy tế bào. Đ u tiờn là đại thực bào phế nang lợn (PAM) và tế bào liờn kết. Mặc dự một vài mẫu mọc riờng biệt hệ thống tế bào này hoặc kia. PAM cú tỏc dụng giỳp phỏt triển của một số l n mẫu, đặc biệt khi phõn lập từ huyết thanh. Bautista và cộng sự đó phõn lập được 1 mẫu virus từ 98 mẫu thớ nghiệm. Trong đú:
- 4 phõn lập cả 2 mụi trường nuụi cấy. - 4 phõn lập được ch tế bào CL – 2621. - 7 phõn lập riờng PAM.
Hơn nữa Bautista cũng đó thử phõn lập virus 73 mẫu huyết thanh kết quả là: - 2 mẫu phõn lập được hai hệ thống nuụi cấy.
- 16 mẫu ch phõn lập được PAM.
G n đõy tế bào nuụi cấy cú chất lượng cao phỏt triển từ tế bào thận kh đơn dũng cho khả năng m i để phõn lập virus. Virus PRRS được phõn lập từ huyết thanh, huyết tương, bạch c u ngoại vi, tuỷ xương, lỏch,... phõn lập điển hỡnh lợn đang phỏt triển trong 4 tu n. Điều quan trọng là duy trỡ mẫu huyết
thanh và mụ tủ lạnh hoặc nhiệt độ õm trư c khi đưa ra phõn lập virus để ngăn cản sự mất tớnh gõy nhiễm. Virus được phõn lập từ lợn đẻ ra bị chết, dịch và huyễn dịch mụ thai đẻ ra bị yếu, nhưng khụng phải lấy từ thai chết khụ. Virus h u như khụng hoạt động trong khi thai đang bị phõn hủy và thối rữa.
Hai phương phỏp b sung khỏng thể huỳnh quang và kỹ thuật Immunoperoxidase cho phộp chẩn đoỏn phỏt hiện trực tiếp khỏng thể trong mụ. Những kỹ thuật này ngày nay khụng được sử dụng rộng rói nhưng vỡ chỳng phỏt hiện nhanh chúng virus trong mẫu mụ, cụng dụng của nú chắc chắn sẽ m rộng trong tương lai.
Trong luận ỏn này chỳng tụi ỏp dụng phương phỏp nhuộm húa mụ miễn dịch để phỏt hiện virus trong cỏc mụ bào lợn mắc PRRS. Nội dung chi tiết của phương phỏp và kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi sẽ được trỡnh bày cỏc ph n sau.
1.7. Phũng bệnh
1.7.1. Phũng bệnh bằng vệ sinh chăn nuụi tốt
Vệ sinh phũng bệnh là yếu tố rất c n thiết trong chăn nuụi, phương phỏp này vừa rẻ vừa hiệu quả. Tuy nhiờn người chăn nuụi c n nghiờm tỳc thực hiện và cú kế hoạch vệ sinh chuồng trại định kỳ. Thực hiện tốt cụng tỏc cỏch ly gia sỳc bệnh, gia sỳc m i nhập trại sẽ hạn chế tốt dịch PRRS. Thụng thường ngày nay người ta ỏp dụng hai biện phỏp là vệ sinh bằng cơ gi i và vệ sinh bằng thuốc sỏt trựng để phũng dịch PRRS.
1.7.2. Phũng bệnh bằng vaccine
Một số loại vaccine thường dựng
Vaccine BSL-PS 100:
Vaccine PRRS nhược độc đụng khụ thế hệ m i cú nguồn gốc từ chủng JKL-100 thuộc dũng chõu Mỹ. Một liều chứa ớt nhất 105.0TCID 0. Cú độ an toàn rất cao, vaccine an toàn dự tiờm cao gấp 20 liều.
- Hiệu quả: Thực nghiệm chứng minh hiệu quả trờn lợn con theo mẹ t
lệ tử vong 0% so v i lụ đối chứng khụng sử dụng vaccine là 7%. Trờn lợn thịt tăng thờm tỷ lệ sống 1 % so v i lợn khụng tiờm phũng.
Một tu n sau khi tiờm phũng, hàm lượng khỏng thể trong mỏu đạt được mức bảo hộ và thời gian miễn dịch kộo dài 16 tu n.
- Liều lư ng và lị h tiờm phũng:
Tiờm bắp 2ml/liều
+ Nỏi tơ và nỏi mang thai: Tiờm chủng trư c khi cai sữa hoặc trư c khi phối giống.
+ L n đự : tiờm chủng lỳc 18 tu n tu i và tỏi chủng hàng năm
+ L n n: Ở trại khụng cú dịch tiờm một l n lỳc 3 tu n tu i, v i trại cú dịch tiờm phũng l n 1 vào lỳc 3 tu n tu i, tiờm lại l n 2 lỳc 6 tu n tu i. Nếu trại đang cú dịch tiờm ngay cho nỏi mang thai dư i 70 ngày của thai kỳ.
Lưu : ch được pha vaccine v i chớnh nư c pha của vaccine.
Vaccine BSK-PS100:
Vaccine vụ hoạt chứa chủng virus PRRS dũng Chõu Âu. Một liều vaccine chứa ớt nhất 107.5
TCID50. Vaccine cú độ an toàn rất cao, thử nghiệm đó chứng minh BSK-PS100 an toàn dự chủng cao gấp 10 liều. Vaccine an toàn v i vật mang thai.
- Hiệu quả: Thực nghiệm đó chứng minh trờn lụ lợn nỏi cú tiờm vaccine tỷ lệ sống sút của lợn sơ sinh cao hơn 6,4%, tỷ lệ lợn sơ sinh chết thấp hơn 3,7%, tỷ lệ thai chết lưu và thai gỗ thấp hơn 3,6% và tỷ lệ lợn con cai sữa cao hơn 9,1%, so v i lụ lợn nỏi khụng tiờm vaccine.
- Liều lư ng và lịch tiờm phũng:
Tiờm bắp 2ml/liều
+ Nỏi hậu bị: tiờm lỳc 18 tu n tu i, tiờm nhắc lại sau 3-4 tu n + Nỏi rạ: tiờm phũng 3-4 tu n trư c khi phối giống
+ Nỏi mang thai: tiờm phũng lỳc 60-70 ngày của thai kỳ
+ Đự giống: tiờm lỳc 18 tu n tu i, mỗi 6 thỏng tiờm nhắc lại một l n Vaccine Amervac-PRRS
Vaccine nhược độc dạng đụng khụ, chứa virus PRRS dũng Chõu Âu VP046BIS, mỗi liều chứa ớt nhất 103.5
TCID50.
- Hiệu quả: VP046BIS cú khả năng bảo vệ tất cả cỏc chủng chõu Âu
khỏc và chõu Mỹ. Đõy là chủng an toàn nhất trong cỏc chủng Chõu Âu và hoàn toàn khụng gõy hoàn nguyờn độc lực.
- Liều lư ng và lị h tiờm phũng:
Tiờm vào cơ c . Mỗi liều 2ml/con cho mọi lứa tu i, gi i tớnh, trọng lượng.
+ L n n: tiờm phũng một l n vào lỳc 3-4 tu n tu i, khả năng bảo hộ
t i thỏng tu i.
+ Nỏi hậu bị: tiờm phũng một l n thời điểm tu n trư c khi phối
giống.
+ Đự giống: tiờm phũng lỳc tu n tu i, sau đú tiờm nhắc lại 6 thỏng 1
l n
+ Nỏi: tiờm phũng 1 liều sau khi sinh 12 – 15 ngày.
Hiện nay nư c ta đó xỏc định được PRRSV gõy dịch bệnh cú cả 2 chủng Virus gõy ra, do vậy hiện nay nư c ta đang sử dụng hai loại vaccine là BSL-PS 100 và BSK-PS để phũng bệnh.
G n đõy nhất, Cục thỳ y đó ban hành cụng văn số 2128/TY-DT ngày 15 thỏng 12 năm 2010 hư ng dẫn sử dụng vaccine PRRS. Theo đú Cục thỳ y đó
khuyến cỏo loại vaccine nhược độc đụng khụ chủng JXA1-R do Trung Quốc sản xuất. Đặc điểm đõy là vaccine nhược độc đụng khụ đó được khảo nghiệm tại Việt Nam. Chủng virus dựng để chế vaccine là chủng cường độc của Trung Quốc (thuộc dũng Bắc Mỹ), được cấy truyền nhiều đời trờn mụi tường tế bào để làm giảm độc lực. Ch định vaccine này dựng để phũng PRRS do chủng virus thể độc lực cao thuộc dũng Bắc Mỹ gõy ra cho lợn. Liều dựng như sau:
+ Đối v i lợn con từ 14 đến dư i 30 ngày tu i, tiờm 1ml (1/2 liều), sau 28 ngày tiờm nhắc lại 2ml (1 liều), sau đú cứ 4 thỏng lại tiờm nhắc lại 1 l n 2ml (1 liều).
+ Đối v i lợn trờn 30 ngày tu i tiờm 2ml (1 liều), sau đú cứ 4 thỏng lại tiờm nhắc lại 2ml (1 liều).
Đường tiờm: Tiờm bắp sõu sau vành tai. Một số lưu khi sử dụng caccine:
+ Đối tượng tiờm phũng: Tiờm cho lợn khỏe mạnh từ 14 ngày tu i tr lờn. Lợn nỏi trư c khi phối giống và đực giống. (Chỳ : đối v i đực giống phải ngừng khai thỏc tinh trong vũng 2 thỏng kể từ lỳc tiờm phũng)
+ Tớnh an toàn của vaccine: vaccine đó được kiểm chứng là an toàn; tuy nhiờn, sau khi tiờm cú thể xuất hiện phản ứng phụ như sốt nhẹ, tăng t n số hụ hấp, những triệu chứng này sẽ mất đi trong vũng 2 ngày; cú thể can thiệp bằng cỏc loại thuốc chữa triệu chứng thụng thường. Kết quả khảo nghiệm cho thấy tỷ lệ lợn cú phản ứng, chết thấp dư i 1%. Cú thể sử dụng chung bơm tiờm, kim tiờm cho lợn trong cựng 1 ụ chuồng. Trư c khi tiờm cho đàn lợn ụ chuồng khỏc phải tiệt trựng bơm, kim tiờm hoặc thay bơm kim tiờm vụ trựng khỏc. Ch tiờm vaccine cho đàn lợn khỏe mạnh.
Vaccine cú tỏc dụng kớch thớch lợn sinh đỏp ứng miễn dịch 14-28 ngày sau khi tiờm. (chi tiết hơn về vaccine JXA1-R được trỡnh bày ph n phụ lục)
1.8. Điều trị bệnh
Như chỳng ta đó biết đõy là một bệnh do virus gõy ra và ghộp v i rất nhiều bệnh khỏc như: DTL, viờm ph i dớnh sườn, suyễn lợn, liờn c u lợn,