Hình 3 .12 Cắt vector pGEMT-T4(A) và vector pET32a+ (B) bằng enzyme EcoRI
Hình 3.21 Điện di SDS-PAGE gel polyacrylamide 15% dịng số 3,4
Giếng1,5: protein của dòng vi khuẩn số 3,4 chưa cảm ứng bởi IPTG
Giếng 2,3,4: protein của dòng vi khuẩn số 3 cảm ứng bởi IPTG trong 2h, 4h, 6h. Giếng 6,7,8: protein của dòng vi khuẩn số 4 cảm ứng bởi IPTG trong 2h, 4h, 6h. Giếng M: Broad-way Multi prestained protein Marker
Giếng số 1,5 là mẫu protein của dòng vi khuẩn số 3,4 chƣa cảm ứng IPTG không xuất hiện các vạch protein lạ.
Các giếng 2,3,4 là mẫu protein của dòng vi khuẩn số 3 đƣợc cảm ứng bởi IPTG trong 2h,4h,6h xuất hiện một băng vạch protein đậm có kích thƣớc là 25kDa tƣơng ứng với kích thƣớc lý thuyết của kháng nguyên T4.
Các giếng số 6,7,8 là mẫu protein của dòng vi khuẩn số 4 đƣợc cảm ứng bởi IPTG trong 2h,4h,6h xuất hiện một băng vạch protein đậm có kích thƣớc là 25kDa tƣơng ứng với kích thƣớc lý thuyết của kháng nguyên T4.
Độ đậm của băng protein tăng theo thời gian nuôi cấy sau khi cảm ứng bởi IPTG, protein thu đƣợc khi bổ sung IPTG sau 6h nuôi cấy đậm hơn so với 4h và 2h.
Các kết quả này cho thấy đã biểu hiện thành công gen T4 trong vi khuẩn E.
coli BL21(DE3) ở các dòng vi khuẩn BL21- pET32/T4 số 2, 3, 4; protein tái tổ hợp
có kích thƣớc là 25kDa tƣơng ứng với kích thƣớc lý thuyết của kháng nguyên T4 của NNV.
Kết quả biểu hiện protein của gen T4 mã hóa kháng nguyên của NNV đƣợc khẳng định lại bằng phƣơng pháp lai Western blot với kháng thể đặc hiệu kháng virus gây bệnh hoại tử thần kinh cho thấy, vị trí phản ứng giữa protein tái tổ hợp T4 với kháng thể đặc hiệu chuẩn tƣơng ứng với vị trí phản ứng giữa kháng nguyên T4 chuẩn của Pierce, Mỹ và kháng thể đặc hiệu chuẩn tại vạch điện di có kích thƣớc khoảng 25 kDa trên thang chuẩn (hình 3.22). Kết quả này cho phép kết luận rằng kháng nguyên T4 của NNV đã đƣợc biểu hiện thành công trong tế bào E. coli BL21(DE3).