VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Vật liệu, thiết bị, hóa chất và địa điểm nghiên cứu
2.1.1. Vật liệu
Vật liệu sử dụng trong nghiên cứu là 02 giống đậu xanh: Giống ĐXHL10 do Trung tâm Nghiên cứu và Phát triển Đậu đỗ, Viện Cây lương thực và Cây thực phẩm thuộc Bộ Nông nghiệp cung cấp, và giống đậu tằm (Đậu Mốc) thu thập tại địa phương (xã Động Lâm, huyện Hạ Hòa, tỉnh Phú Thọ) ký hiệu là ĐXĐP.
Giống đậu xanh ĐXHL10 được chọn tạo từ tổ hợp (BPI MG 50-10A x V87-13), theo phương pháp gia phả truyền thống. ĐXHL10 là sản phẩm của đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu chọn tạo giống và các biện pháp canh tác đậu xanh cho các vùng trồng chính giai đoạn 2011-2013”. Giống đậu xanh ĐXHL10 có các đặc điểm chính: thời gian sinh trưởng: 62-65 ngày, chiều cao cây 50- 64cm, lá xanh trung bình. Ra hoa và chín tập trung, tỷ lệ thu hoạch lần 1 đạt khoảng 75-85%. Vỏ quả khi chín màu đen, dài khoảng 10-12cm. Hạt màu xanh sáng, cấp hạt đều, đóng hạt chặt. Trọng lượng 1000 hạt 63-68g tuỳ theo mùa vụ, hàm lượng protein 17,9%.
a b
Hình 2.1. Hình ảnh hạt của mẫu giống đậu xanh nghiên cứu
2.1.2. Hóa chất
Sử dụng các loại hóa chất tinh khiết và thông dụng có nguồn gốc từ Anh, Đức, Mỹ, Thụy Điển, Trung Quốc như: CTAB, EDTA, tris, ethanol, natri clorua, đệm PCR, Taq DNA polymerase, MgCl2, dNTPs, agarose và các hóa chất khác được mua của hãng Invitrogen.
- Các hóa chất dùng trong phân lập gen như Taq polymerase, buffer PCR, SDS, EDTA, Tris... của Invitrogen.
- Cặp mồi nhân gen CHI được thiết kế dựa trên sự phân tích trình tự gen CHI của giống đậu xanh được công bố tại ngân hàng GenBank - NCBI với mã số NM_001317294.1.
Bảng 2.1. Cặp mồi nhân gen CHI
Mồi Trình tự mồi (5’-3’) Nhiệt độ gắn mồi Kích thước dự kiến từ khuôn từ cDNA CHI-F ATGGCAACAAAGCACCCAC 56oC 669 bp CHI-R TCAGAGTATA ATGCCGTCCT 56oC
- Vector tách dòng pBT của Viện Công nghệ Sinh học.
- Bộ kit dùng cho phản ứng PCR QIAquick Gel Extraction Kit, tinh sạch sản phẩm PCR AccuPrep PCR Purification Kit (Bioneer), bộ kit tách dòng TA Cloning Kit (Invitrogen), bộ kit tách plasmid tái tổ hợp AccuPrep Plasmid Mini Extraction Kit (Bioneer)...
- Các loại hóa chất khác: agarose, cồn tuyệt đối, sorbitol, chloroform... của Việt Nam, Trung Quốc sản xuất.