CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU
2.2. Hóa chất, dụng cụ và thiết bị
2.2.1. Hóa chất
- Mẫu chuẩn THC-COOH 0,1 mg/ml, THC-COOH-d3 1 mg/ml Arlesheim, Thụy Sỹ do Liên hợp quốc cấp với lượng chính xác là 0,1 mg.
- Các hóa chất cịn lại đều là hóa chất tinh khiết dùng trong phân tích (đạt tiêu chuẩn PA):
+ Axit TCA tinh khiết 99%. + Muối Amoniacetat
+ Muối khan Na2SO4 (Merck, Đức) được nung ở 2500C trong 2h trước khi sử dụng.
+ Nước cất hai lần.
+ Khí N2 kỹ thuật 99% dùng để đuổi dung môi.
+ Các dung môi tinh khiết: Etylaxetat, methanol, hexanee (Merck, Đức). + Kít thử miễn dịch Acon, Mỹ.
- Cách pha dung dịch chuẩn gốc, dung dịch chuẩn làm việc, các dung dịch chuẩn ở nồng độ khác nhau, dung dịch nội chuẩn như sau:
+ Pha các dung dịch chuẩn và dung dịch axit TCA * Pha dung dịch chuẩn gốc 5 µg/ml:
Dung dịch chuẩn gốc nồng độ 5 µg/ml được chuẩn bị như sau: Hút 0,5ml dung dịch chuẩn 100 µg/ml vào bình định mức, sau đó dùng CH3OH định mức đến 10ml, được nồng độ 5 µg/ml. Dung dịch chuẩn gốc được bảo quản ở 2 - 4oC
* Pha dung dịch chuẩn làm việc 0,5 µg/ml:
Hút 1ml dung dịch chuẩn gốc 5 µg/ml vào bình định mức, sau đó dùng CH3OH định mức đến 10ml, được nồng độ 0,5 µg/ml. Dung dịch chuẩn làm việc được bảo quản ở 2 - 4oC.
* Pha dung dịch chuẩn kiểm tra 0,1 µg/ml:
Hút 0,01ml (10 µl) dung dịch chuẩn 100 µg/ml vào bình định mức, sau đó sau đó dùng CH3OH định mức đến 10 ml, được nồng độ 0,1 µg/ml. Dung dịch chuẩn kiểm tra được bảo quản ở 2 - 4oC.
* Dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc 5; 10; 25; 50; 100; 400 ng/ml: được pha từ dung dịch chuẩn làm việc trong dung môi là methanol hoặc pha trong nền mẫu trắng. Các dung dịch này chỉ pha khi sử dụng.
+ Pha dung dịch nội chuẩn:
* Pha dung dịch nội chuẩn gốc 1000 ng/ml: Hút 0,1 ml dung dịch nội chuẩn có sẵn cho vào bình định mức, sau đó dùng CH3OH định mức đến 10ml, được nồng độ 1000 ng/ml. Dung dịch nội chuẩn gốc được bảo quản ở 2 - 4oC.
* Pha dung dịch nội chuẩn làm việc 100 ng/ml: Hút 1 ml dung dịch nội chuẩn gốc cho vào bình định mức, sau đó dùng CH3OH định mức đến 10 ml, được nồng độ 100 ng/ml. Dung dịch nội chuẩn làm việc được bảo quản ở 2 - 4oC.
+ Pha dung dịch axit TCA ở pH từ 1 đến 5:
Tiến hành cân 1gam axit TCA pha thành 100 ml dung dịch axit TCA ở nồng độ 1% để đạt pH = 1, sau đó pha lỗng dung dịch dùng máy đo pH để có dung dịch pH = 2, 3, 4 và 5
Sau khi phân tích và dựng đường chuẩn, sẽ sử dụng các kết quả nằm trong khoảng tuyến tính của đường chuẩn cho mục đích phân tích định lượng THC-COOH có mặt trong máu của đối tượng sử dụng cần sa.
2.2.2. Dụng cụ và thiết bị
- Ống nhựa ly tâm có nắp loại 10 ml. - Bình định mức 10 ml.
- Pipet, ống đong các loại, phễu chiết, cốc thủy tinh, đũa thủy tinh bình định mức các loại.
- Máy đo pH Thermo scientific, Mỹ. - Tủ sấy, tủ ấm.
- Cân phân tích Sartorius CPA 225D có độ chính xác 10-5. - Máy điều nhiệt Memmer, Germany.
- Máy cô quay Eyela, Japan. - Máy siêu âm Branson 1510. - Máy lắc Unitwist 300.
- Máy LC-MS/MS Bruker, Mode: EVOQ Qube TM+HPLC Advance của Bruker (Mỹ).