Kết quả thể hiện trong bảng 3.2 và hình 3.3 cho thấy độ thu hồi các chất phân tích tại tỉ lệ dung môi hexanee/etylaxetate: 9:1 (v/v) là tốt nhất, hexanee là dung mơi khơng phân cực cịn etylaxetate có độ phân cực thấp sẽ làm cho khả năng tách THC-COOH dễ nhất, đồng thời chúng là dung mơi dễ mua, ít tốn kém, thường được sử dụng trong các phịng thí nghiệm phân tích ma túy tại các địa phương, ít độc hại hơn so với các dung môi khác. Phương pháp chiết lỏng – lỏng cũng đã được áp dụng nhiều trong các nghiên cứu trước đây, tỷ lệ dung môi tối ưu này đã được áp dụng để tách chiết THC và các dạng chuyển hóa của chúng trong mẫu máu cũng như mẫu nước tiểu [12].
Vì vậy, để tối ưu q trình phân tích, hỗn hợp dung môi hexanee/etylaxetate (9:1, v/v) được lựa chọn để tách THC-COOH ra khỏi máu của đối tượng sử dụng cần sa.
3.2.2. Kết quả khảo sát môi trường chiết (pH)
Môi trường chiết là một trong những yếu tố quan trọng ảnh hưởng tới hiệu suất của quá trình chiết. Các mẫu được tiến hành chiết ở các pH khác nhau sẽ cho hiệu suất chiết khác nhau. Do đặc điểm cơng thức cấu tạo có 2 nguyên tử H+ linh động của nhóm –OH và nhóm –COOH nên THC-COOH có các phản ứng hóa học đặc trưng của nguyên tử H+, có tính axit nên khoảng pH nghiên cứu để chiết xuất là pH axit. Để đánh giá độ thu hồi chất phân tích ở
0 20 40 60 80 100 0 1 2 3 4 5 6 7 Hi ệu suất thu hồi H (% )
pH khác nhau ta tiến hành xử lý mẫu chọn axit TCA vừa kết tủa protein vừa tạo môi trường pH chiết. Tương tự như khảo sát dung môi chiết, sau khi chọn được hệ dung môi tối ưu cho quá trình chiết thì ta tiến hành khảo sát môi trường chiết. Quá trình lấy mẫu huyết tương, mẫu chuẩn và nội chuẩn thêm vào cũng dùng thể tích như khảo sát dung môi.
Lấy 1 ml huyết tương trắng, thêm 10 μl dung dịch THC-COOH nồng độ 200 g/ml, thêm 1 ml dung dịch axit TCA ở pH khác nhau từ 1 đến 5. Sau đó tiến hành chiết các mẫu theo quy trình xử lý mẫu bằng hệ dung mơi 9:1, thêm 10 μl dung dịch THC-COOH-d3 nồng độ 200 ng/ml vào dịch chiết. Làm khô hồn tồn và hịa tan lại cặn bằng 20 μl dung môi. Tiến hành khảo sát trên thiết bị và so sánh trực tiếp với hỗn hợp chuẩn 100 ng/ml không xử lý. Mỗi thí nghiệm lặp lại ba lần và lấy kết quả trung bình. Độ thu hồi tại các giá trị pH khác nhau được tính như đã trình bày ở phần khảo sát dung môi [27].
Kết quả độ thu hồi tại các giá trị pH khác nhau bảng 3.3 và hình 3.4.
Bảng 3. 3. Độ thu hồi chất phân tích trong máu tại các pH khác nhau
pH STHC-COOH/ STHC-COOH- d3 Trung bình STHC-COOH/ STHC-COOH- d3 Trung bình so sánh Độ thu hồi (%) 1,0 0,185 0,359 51,5% 2,0 0,236 0,359 65,7% 3,0 0,233 0,359 64,9% 4,0 0,291 0,359 81,1% 5,0 0,267 0,359 74,4%