- Phương pháp phân tích định tính:
Nguyên tắc của các phép phân tích định tính là dựa vào một yếu tố đặc trưng của tín hiệu tương ứng với mỗi cấu tử để nhận diện chúng. Trong sắc lỏng người ta sử dụng yếu tố đặc trưng là thời gian lưu để nhận diện các cấu tử bằng cách so sánh thời gian lưu của chúng với thời gian lưu của chất chuẩn. Sử dụng phương pháp LC/MS/MS, ngoài việc nhận diện các cấu tử thông qua yếu tố thời gian lưu, chất cần phân tích cịn được nhận diện dựa trên cơ sở xác định khối lượng phân tử của các hợp chất hóa học bằng việc phân tách các ion phân tử theo tỉ số giữa khối lượng và điện tích (m/z) của chúng. Các ion có thể tạo ra bằng cách thêm hay bớt điện tích của chúng như loại bỏ electron, proton hóa,.. Các ion tạo thành này được tách theo tỉ số m/z và phát hiện, từ đó có thể cho thơng tin về khối lượng hoặc cấu trúc phân tử của hợp chất [20, 21].
- Phương pháp phân tích định lượng:
Trong sắc kí, hai phương pháp thường được sử dụng để định lượng chất phân tích là phương pháp nội chuẩn và phương pháp ngoại chuẩn.
Phương pháp nội chuẩn dựa trên sự so sánh cường độ tín hiệu của chất cần phân tích với tín hiệu của chất nội chuẩn. Các chất dùng làm chất nội chuẩn là các chất khơng có trong thành phần của mẫu, cho tín hiệu ổn định và khoảng thời gian lưu nằm gần khoảng thời gian lưu của chất
biết. Khi tính tốn máy sẽ dựa vào tỉ lệ tín hiệu của chất cần phân tích với tín hiệu của chất nội chuẩn để tính ra nồng độ. Phương pháp này có độ chính xác cao vì nó loại bỏ được các yếu tố gây ảnh hưởng đến tín hiệu phân tích (yếu tố nền, sự sai khác về thể tích bơm mẫu giữa các lần đo).
Nguyên tắc của phương pháp ngoại chuẩn là so sánh trực tiếp độ lớn của các tín hiệu (diện tích hay chiều cao peak thu được) trong mẫu chưa biết với dung dịch chuẩn của chất đó. Trước tiên cần bơm dung dịch chuẩn của chất cần phân tích với các nồng độ thích hợp. Từ các kết quả thu được ta xây dựng đường chuẩn có dạng: y = a + bx. Đo diện tích (hoặc chiều cao) peak của chất cần phân tích (giá trị y) và áp vào đường chuẩn ta có thể tính ra nồng độ cấu tử cần phân tích (giá trị x).
Với thiết bị phân tích hiện đại LC-MS/MS phân tích mẫu theo chế độ MRM với ion hóa mẫu âm cho kết quả phân tích nhanh, có độ ổn định, chính xác và độ nhạy cao, lượng mẫu dùng trong phân tích nhỏ nên chúng tơi dùng phương pháp nội chuẩn để phân tích định lượng [14, 19].
1.4. Cơ chế phân mảnh của THC-COOH
Phân mảnh của THC-COOH sau khi sử dụng chế độ nguồn Ion hóa ESI (-) [M-H]- và sử dụng kỹ thuật ghi phổ MRM có các phân mảnh m/z = 343; 299; 245; 191 được thể hiện như sau [22]: