STT 100ng/ml tR (phút) STHC-COOH/ STHC-COOH-d3 1 3,368 0,341 2 3,375 0,356 3 3,350 0,367 4 3,355 0,356 5 3,352 0,326 6 3,342 0,340 TB 3,357 0,340 RSD (%) 0.33 3,74
Hệ số biến thiên của tỉ lệ diện tích peak 3,74 đáp ứng yêu cầu để ứng dựng phương pháp khối phổ (≤5%), trong khi hệ số biến thiên của thời gian lưu rất thấp (< 1 %) cho thấy thiết bị có độ ổn định đáp ứng u cầu phân tích đềra. Như vậy hệ thống sắc ký phù hợp, có độ lặp lại tốt, độ chính xác cao, áp dụng được cho phân tích định tính và định lượng trên sắc ký được.
3.3.1.2. Độ chọn lọc
Phân tích mẫu chuẩn, mẫu huyết tương trắng, mẫu huyết tương thêm chuẩn và nội chuẩn rùi tiến hành chiết các mẫu theo quy trình xử lý mẫu đã xây dựng, tiến hành ở điều kiện pH và dung môi như đã khảo sát ở trên ở mục 3.2.1 và 3.2.2. Theo yêu cầu, mẫu trắng phải khơng được cho tín hiệu chất phân tích, trong khi mẫu thêm chuẩn phải cho tín hiệu chất phân tích tại thời gian lưu trùng với thời gian lưu trên mẫu chuẩn [30].
Chuẩn bị 03 mẫu gồm: Hỗn hợp mẫu chuẩn, mẫu huyết tương trắng; mẫu huyết tương trắng thêm chuẩn 100 ng/ml và nội chuẩn 100 ng/ml. Chiết các mẫu theo quy trình. Hình 3.5 giới thiệu sắc ký đồ của hỗn hợp chuẩn, mẫu huyết tương trắng thêm chuẩn và mẫu huyết tương trắng.
Hình 3.6. Peak ở 3 mẫu khảo sát độ chọn lọc
Thời gian lưu của THC-COOH và THC-COOH thêm chuẩn hoàn toàn giống với trên mẫu chuẩn, không xuất hiện peak ở mẫu trắng ở khoảng thời gian của các peak nói trên. Do vậy phương pháp đặc hiệu, chọn lọc đối với THC-COOH.
3.3.2. Xây dựng đường chuẩn và định lượng
Đường chuẩn được chuẩn bị trên nền mẫu huyết tương để loại trừ ảnh hưởng nền . Mẫu huyết tương trắng được thêm dung dịch chuẩn tạo thành các hàm lượng 5 – 400 ng/ml. Hàm lượng nội chuẩn giữ cố định là 100 ng/ml. Chiết các mẫu theo quy trình. Tiến hành sắc ký. Xác định sự tương quan giữa hàm lượng các chất phân tích có trong mẫu với giá trị tỉ lệ diện tích peak của
Mẫu chuẩn
Mẫu thêmchuẩn Mẫu chuẩn nội
Mẫuthêmchuẩn nội
Nền mẫu Nền mẫu
chất chuẩn và nội chuẩn bằng phương pháp hồi quy tuyến tính. Kết quả thể hiện ở bảng 3.7.