Luận văn đã nghiên và xây dựng quy trình phân tích THC-COOH trong huyết tương xử lý mẫu bằng chiết lỏng – lỏng và bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ kép (LC-MS/MS). Phương pháp cho hiệu suất thu hồi cao, độ ổn định và lặp lại tốt, giới hạn phát hiện đạt ngưỡng thấp 3 ng/ml, đáp ứng được yêu cầu của một phương pháp chuẩn, do đó hoàn toàn có thể sử dụng phương pháp này để phân tích và định lượng nồng độ THC-COOH trong máu của người sử dụng cần sa. Trong luận văn này tiến hành phân tích 9 mẫu thực tế
Sau khi đã xây dựng và thẩm định, quy trình được áp dụng để phân tích với 9 mẫu máu dương tính với que thử miễn dịch cần sa thu được từ các vụ án mà Cơ quan điều tra gửi đến Viện Khoa học hình sự. Các thông tin về mẫu
Thêm 1ml TCA, pH=4, 10 μlIS 200 ng/ml
1 ml máu
Thu lớp dung dịch bên trên
Lắc trong 10 phút, ly tâm phân lớp
Thu dịch chiết, loại nước bằng Na2SO4 khan
Cô chân không, thu cặn chiết
Hòa tan cặn chiết bằng 20 µl CH3OH, Lọc qua fillter Thêm 3ml hexan/etylaxetate (9:1, v/v) Bơm 2 µl vào LC-MS/MS Lắc xoáy mẫu 10 phút, sau đó ly tâm
không được đưa vào luận văn và đã được mã hóa từ M1 - M9 để đảm bảo tính bảo mật thông tin. Kết quả thu được trong bảng 3.8 dưới đây.
Bảng 3. 8. Kết quả định lượng thu được từ một số mẫu thực
TT STHC-COOH/ STHC-
COOH- d3
Khối lượng THC-COOH (ng/ml) M1 0.088 25,61 M2 0.136 40,15 M3 0.147 43,48 M4 0.164 48,64 M5 0.083 24,09 M6 0.144 42,58 M7 0.152 45,00 M8 0.148 43,79 M9 0.082 23,79
Trên sắc đồ các mẫu máu, chất THC-COOH được xác định thông qua thời gian lưu và phổ khối của chúng. Kết quả phân tích 9 mẫu dương tính que thử miễn dịch cần sa cho thấy tất cả các mẫu máu được kiểm tra đều có ma túy. Đối tượng có tiền sử sử dụng cần sa và đối tượng mới sử dụng cần sa có hàm lượng THC-COOH được phát hiện với hàm lượng cao hơn các đối tượng ít sử dụng tại thời điểm lấy mẫu.
Kết quả thực nghiệm cho thấy, phương pháp LC-MS/MS đã xây dựng và thẩm định phù hợp để định lượng THC-COOH trong máu những người sử dụng. Phương pháp có độ đặc hiệu, chọn lọc và độ đúng cao, thích hợp để xác định hàm lượng chất THC-COOH trong máu người sử dụng.
Từ kết quả hàm lượng THC-COOH thu được trên một số mẫu máu có thể đánh giá lại được tiền sử và mức độ sử dụng cần sa của đối tượng.