Trong nghiên cứu này, tỷ lệ sống của phôi là 99,85%. Tỷ lệ sống cao như vậy bởi chúng tôi đã áp dụng kỹ thuật đơng rã Thủy tinh hóa (Vitrification) kỹ thuật này cho tỷ lệ sống cao hơn kỹ thuật đông phôi chậm nên số phôi sống sau rã đông là gần như 100%. Tỷ lệ sống này nó cũng phụ thuộc vào kỹ năng thao tác, chất lượng của môi trường sử dụng.
3.2.2. Chất lượng của phơi sau rã đơng
Hình 3. 5. Chất lượng phơi chuyển 99.85%
0.15% Tỷ lệ sống sót của phơi sau
Tỷ lệ sống sót (%), N=679 Tỷ lệ thối hóa(%), N=1 0 200 400 600 800 Tổng Rất tốt Tốt Trung bình Xấu 679 148 379 111 41 Tổng số phơi chuyển C hấ t l ượng phơi
Tổng số có 679 phơi chuyển, số phơi tốt và rất tốt chiếm 77,61%. Số còn lại là phơi trung bình, xấu chiếm 22,39%.
3.2.2.1 Đánh giá hình thái lá ni
Đánh giá hình thái lá ni (TE) theo tiêu chuẩn Gardner D. K1999, chúng tôi thu được kết quả như sau:
Hình 3. 6. Hình thái lá ni
Tổng có 679 phơi được nghiên cứu, số phơi có tế bào lá ni loại A và loại B là 568 phôi chiếm 83,65%. TE loại C là 111 chiếm 16.35%.
3.2.2.2 Đánh giá hình thái ICM
Đánh giá hình thái nụ phơi (ICM) theo tiêu chuẩn Gardner D. K 1999, chúng tôi thu được kết quả như sau:
Hình 3. 7. Hình thái ICM 22.97% 22.97%
60.68% 16.35%
Đánh giá hình thái TE
Loại A, N=156 Loại B, N=412 Loại C, N= 111
21.80%
56.55% 21.65%
Đánh giá hình thái ICM( %)
A và loại B là 532 phôi chiếm 78,35%.
Bảng 3.1.So sánh chất lượng phôi trước và sau rã đông
Chất lượng Trước đông lạnh Sau rã đông
Rất tốt 149 148
Tốt 387 379
Trung bình 110 111
Xấu 34 41
Tổng N=680 N=679(1 phơi thối hóa)
Phơi rất tốt chỉ 1 phơi chuyển sang phơi tốt, phơi tốt thì 9 phơi chuyển xuống trung bình, cịn phơi trung bình 8 phơi chuyển sang phơi xấu và 1 phơi xấu trước đơng bị thối hóa sau rã đơng.
3.2.3. Kết quả thai sau chuyển phôi
Bảng 3.2. Kết quả sau chuyển phôi nang trữ đông
Các đặc điểm nghiên cứu Kết quả thai N Số chu kỳ N=365
Tỷ lệ (%)
Β-hCG (+) 273 365 74,79
Thai sinh hóa 28 365 7,67
Thai lâm sàng 245 365 67,12
Đa thai 29 365 7,95
Thai tiến triển 242 365 66,30
Số phôi chuyển (N)
Số phôi làm tổ 274 40,35
Tổng số phôi chuyển 679 100
Tỷ lệ β-hCG dương tính và tỷ lệ thai lâm sàng của nhóm này lần lượt là 74,79% và 67,12%. Tỷ lệ làm tổ của phôi là 40,35%. Đặc biệt thai tiến triển rất khả quan chiếm 66,30%.
3.3. ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ LÊN KẾT QUẢ CHUYỂN
PHÔI TRỮ ĐÔNG
Bảng 3.3. Sự liên quan chất lượng phôi chuyển và thai lâm sàng. Chất lượng phơi Chất lượng phơi Khơng có thai lâm sàng (N) Có thai lâm sàng (N) Tỷ lệ % Tổng (N) Giá trị P Phôi rất tốt + phôi tốt 93 233 71,47% 326 0.0001 Khơng có phơi tốt 27 12 30,77% 39 Tổng 120 245 67.12% 365
Nghiên cứu của chúng tôi ghi nhận tỷ lệ có thai lâm sàng của chuyển phơi nang trữ đơng ở nhóm có phơi tốt cao nhất là 71,47%. Và tỷ lệ thai lâm sàng thấp nhất ở nhóm phơi có chất lượng xấu. Sự khác biệt ở hai nhóm phơi tốt và nhóm phơi xấu sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0.05).
3.3.1.1. Ảnh hưởng của chất lượng phơi đến thai lâm sàng trong nhóm chuyển 2 phôi
Bảng 3.4. Sự tương quan chất lượng phơi trong nhóm chuyển 2 phơi
Nhóm phơi Thai lâm sàng(N) Không thai Lâm sàng(N) Tổng (N) Tỷ lệ% Giá trị P Khơng có phơi tốt 8 14 22 36,36% 0.0023 Có ít nhất 1 phơi tốt 47 29 76 61,84% Hai phôi tốt 147 49 196 75% Tổng 202 92 294 68,71%
Dựa theo kết quả phân tích bảng trên nhóm chuyển 2 phơi thì:
+ Tỷ lệ thai lâm sàng thấp nhất khi chuyển cả 2 phơi loại khơng có phơi tốt là 100*(8/22)=36.36%
+Tỷ lệ thai lâm sàng khi chuyển kèm 1 phơi trung bình với 1 phơi tốt, hoặc 1 tốt là (47/76) *100=61.8%
+ Tỷ lệ thai lâm sàng khi chuyển kèm 2 phôi tốt hoặc 2 phôi tốt hoặc kết hợp 1 phôi rất tốt, 1 phôi tốt là 100*(147/196) = 75%. Như vậy thì có sự khác biệt về tỷ lệ thai lâm sàng ở nhóm chuyển 2 phơi có chất lượng phơi tốt. Và sự
3.3.1.2. Liên quan giữa chất lượng phôi chuyển và tỷ lệ thai lâm sang ở nhóm chuyển 1 phơi
Bảng 3.5. Sự tương quan chất lượng phơi trong nhóm chuyển 1 phơi
Nhóm phơi Thai lâm sàng(N) Không thai Lâm sàng(N) Tỷ lệ% Tổng (N) Giá trị P Khơng có phơi tốt 1 11 8,33 12 0.0001 Có phơi tốt 35 14 71,43 49 Tổng 36 25 59,02 61
+ Kết quả phân tích từ nhóm chuyển 1 phơi. Trường hợp chuyển 1 phơi là phơi trung bình thì kết quả thai lâm sàng là thấp nhất 100*(1/12) =8,33%.
+Trường hợp chuyển 1 phơi là phơi tốt hoặc phơi tốt thì tỷ lệ thai lâm sàng là 100*(35/49) =71,43%. Tỷ lệ thai lâm sàng có sự khác biệt rõ rệt khi chuyển 1 phơi khơng có phơi tốt so với 1 phôi tốt hoặc rất tốt. Và sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê (p=0.0001>0.05.).
3.3.2. Ảnh hưởng của tuổi người mẹ lên kết quả thai
Kết quả thai theo nhóm tuổi 90 80 70 60 50 40 30 82.03 75.78 77.27 71.82 68.48 20 10 0 9.38 2.85 <30 30-34 35-40 >40 Nhóm tuổi
Tỷ lệ thai β-hCG % Tỷ lệ đa thai % Tỷ lệ thai lâm sàng % 8.69 7.27 45.71 57.14 57.61 T ỷ lệ %
Tỷ lệ thai sinh hóa, thai lâm sàng cao nhất nhóm tuổi dưới 30 và giảm dần ở các nhóm, thấp nhất nhóm trên 40 tuổi. Tỷ lệ đa thai cũng cao nhất ở nhóm tuổi dưới 30 và giảm dần ở các nhóm, thấp nhất nhóm trên 40 tuổi. Như vậy tuổi người mẹ có ảnh hưởng đến kết quả thai và thai lâm sàng .
3.3.3. Sự tương quan giữa chất lượng và số lượng phôi chuyển với thai lâm sàng sàng
Bảng 3.6. Sự tương quan giữa chất lượng và số lượng phôi chuyển với thai
lâm sàng
Nhóm
Chất lượng phơi chuyển
Thai lâm sàng(N) Khơng có thai lâm sàng(N) Tỷ lệ % Tổng (N) 1 1 phôi tốt 35 14 71,43 49 2 1 phôi xấu 1 11 8,33 12 3 2 phôi tốt 147 49 75 196
4 2 phơi khơng có phơi tốt 8 14 36,36 22
5 2 phơi (có 1 phơi tốt) 47 29 61,84 76
So sánh(OR) tương quan của nhóm 1 với nhóm 2,3,4,5 ta được kết quả như sau:
Bảng 3.7. So sánh (OR) tương quan của nhóm 1 với nhóm 2,3,4,5
Phân tích kết quả có sự khác biệt giữa nhóm 1 với nhóm 3, nhóm 5 nhưng khơng có ý nghĩa thống kê p>0.05. Sự tương quan của nhóm 1 với nhóm 2 có sự khác biệt và có ý nghĩa thống kê p=0.0001<0.05. Sự tương quan của nhóm
OR 95%CI P
Nhóm 1 với nhóm 2 0.036 0.004-0.309 0,0001 Nhóm 1 với nhóm 3 1.2 0.596-2.414 0.715 Nhóm 1 với nhóm 4 0.299 0.079-0.664 0.05 Nhóm 1 với nhóm 5 0.65 0.299-1.405 0.27
ý nghĩa thống kê.
3.3.4. Bảng sự tương quan giữa tuổi người mẹ với thai lâm sàng Bảng 3. 8. Sự tương quan giữa tuổi người mẹ với thai lâm sàng Bảng 3. 8. Sự tương quan giữa tuổi người mẹ với thai lâm sàng
Tuổi vợ Kết quả Tổng Giá trị P Có thai lâm sàng Khơng có thai lâm sàng Nhóm tuổi Tuổi<35 N 176 62 238 0.03 % 73,95% 26,05% 100% Tuổi≥35 N 69 58 127 % 54,33% 45,67% 100% Tổng N 245 120 365 % 67,12% 32,88% 100%
Nhóm dưới 35 tuổi tỷ lệ có thai lâm sàng 73,95%, nhóm trên 35 tuổi tỷ lệ có thai 54,33%. Phân tích kết quả tỷ lệ có thai lâm sàng thì có sự khác biệt có có ý nghĩa thống kê với p=0.03<0.05 giữa 2 nhóm tuổi dưới 35 và trên 35.
Chương 4: BÀN LUẬN 4.1. BÀN LUẬN VỀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 4.1. BÀN LUẬN VỀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
4.1.1. Bàn luận về đối tượng nghiên cứu
* Cỡ mẫu trong nghiên cứu
Để đảm bảo tính đại diện của mẫu, tính chính xác cũng như đồng nhất của nghiên cứu, cỡ mẫu tối thiểu cần đạt là 351 chu kỳ chuyển phôi nang trữ đông, do đó chúng tơi đã tiến hành chọn ngẫu nhiên và được tổng số 365 chu kỳ từ tháng 1 năm 2021 đến tháng 8 năm 2021, tại Bệnh viện Hỗ trợ sinh sản và Nam học Đức Phúc. Sau đó các biến số và chỉ số nghiên cứu được tập hợp lại để phân tích, xử lý số liệu và so sánh để từ đó rút ra kết luận về tỷ lệ sống, chất lượng phôi sau rã đơng cũng như tỷ lệ có thai và thai lâm sàng, thai sinh hóa. Với phương pháp lựa chọn mẫu đạt đúng tiêu chuẩn nghiên cứu như vậy đảm bảo tính khách quan và độ tin cậy của kết quả nghiên cứu.
* Thiết kế nghiên cứu
Đây là một nghiên cứu mô tả cắt ngang. Thiết kế nghiên cứu này là phù hợp với mục đích nghiên cứu là đánh giá hiệu quả của chuyển phôi nang trữ đông bao gồm xác định được tỷ lệ sống và chất lượng sau rã đông của phôi nang cũng như xác định tỷ lệ có thai và một số yếu tố liên quan hiệu quả chuyển phôi trữ đông.
* Phương pháp thu thập số liệu
Các số liệu về hình ảnh phơi nang ngày 5 và 6 được thu thập bằng cách chụp ảnh qua kính hiển vi đảo ngược, các phơi được đặt trong đĩa nuôi cấy, giữ ấm ở nhiệt độ 370C, thời gian chụp ảnh trong vịng 2 phút. Do đó đảm bảo tính chính xác của hình ảnh phơi mà không ảnh hưởng đến chất lượng và tỉ lệ sống của phôi.
Ngồi ra, những thơng tin khác về bệnh nhân phục vụ cho nghiên cứu được khai thác thông qua bệnh án và hồ sơ được lưu trữ tại Bệnh viện Hỗ trợ sinh sản và Nam học Đức Phúc.
4.1.2. Bàn luận về phương pháp đánh giá phôi nang
Phôi nang (blastocyst) được phát triển trực tiếp từ giai đoạn phôi dâu khi nuôi cấy ngày thứ 4. Hiện nay, có rất nhiều phương pháp đánh giá hình thái phơi nang. Nhưng nhìn chung tất cả các phương pháp đánh giá chất lượng phôi về mặt hình thái đều dựa trên những đặc điểm đặc trưng nhất của phôi, như đối với phơi ở giai đoạn phơi nang thì đặc điểm hình thái đặc trưng là: mức độ giãn rộng khoang phơi nang; hình thái mầm phơi (ICM) và hình thái lá ni (TE) [9]. Việc đánh giá chất lượng phơi nang địi hỏi một hệ thống phân loại chặt chẽ nhưng phải dễ áp dụng và cần đạt được sự nhất trí cao. Hệ thống phân loại phôi nang được nhắc đến nhiều nhất là của Gardner D. K. và Schoolcraft W. B. nêu ra năm 1999. Hệ thống phân loại này phân chia mức độ giãn rộng khoang phôi nang ra thành 6 mức độ. Ngoài ra dựa vào số lượng tế bào và mức độ gắn kết giữa các tế bào của mầm phơi và lá ni, hệ thống lại phân chia hình thái mầm phơi và lá ni thành 3 mức độ, xếp theo thứ tự A- B-C, tương ứng với tốt, trung bình và xấu. Mặc dù cịn một số ngoại lệ nhưng đây là hệ thống phân loại phôi nang được đánh giá là đã bao hàm khá tồn diện các đặc điểm của phơi nang và cũng dễ áp dụng [15]. Cách phân loại phôi nang theo Gardner D. K. và Schoolcraft W. B. cũng là cơ sở để xây dựng tiêu chuẩn đồng thuận Alpha (Istanbul 2011). Đồng thuận này đã được đơn giản hóa chỉ cịn 4 mức độ phân loại cho độ nở rộng khoang phơi nang thay vì 6 mức độ. Trong đó, khi đánh giá phân loại mức độ phát triển khoang phôi nang đã gộp 2 mức độ đầu tiên thành độ 1 và 2 mức độ cuối cùng trong cách đánh giá phân loại khả năng phát triển của khoang phôi nang theo Gardner D. K. và Schoolcraft W. B. thành độ 4. Ngoài ra vẫn giữ nguyên cách phân loại hình thái của lớp tế bào lá ni và mầm phôi theo 3 loại A, B và C [26]. Tuy nhiên, trong nghiên cứu này chúng tôi vẫn sử dụng thống nhất cách đánh giá hình thái phơi nang theo tiêu chuẩn của Gardner năm 1999 để đánh giá chất lượng cho 679 phôi nang của 365 chu kỳ chuyển phôi của bệnh nhân nghiên cứu. Cách đánh giá như vậy hiện nay đang được áp dụng rộng rãi tại các trung tâm hỗ trợ sinh sản trong cả nước cũng như trên thế giới cho nên kết quả nghiên cứu của chúng tôi sẽ dễ dàng so sánh, đối chiếu với kết quả nghiên cứu của các tác giả khác.
4.1.3. Bàn luận về chất lượng phôi trước đơng
phơi tốt chiếm 78,82%, số phơi trung bình và xấu là 144 phơi chiếm 21,18%. Như vậy các phôi trước đông chủ yếu các phôi tốt, chất lượng phôi như vậy giúp cho chúng tơi có tiên lượng được tiềm năng chuyển phơi trữ cũng như góp phần tiên lượng được thành công trong điều trị IVF của chúng tôi.
4.2. BÀN LUẬN VỀ TỶ LỆ SỐNG VÀ CHẤT LƯỢNG PHÔI SAU RÃ ĐÔNG ĐÔNG
4.2.1. Bàn luận về tỷ lệ sống của phôi sau rã đông
Tổng số phôi được rã đông là 685 phôi, 5 phôi tái đơng, 1 phơi thối hóa, 679 phơi được chuyển cho 365 chu kỳ. Trong nghiên cứu này, tỷ lệ sống của phôi là 99,85%. Tỷ lệ sống cao như vậy bởi chúng tôi đã áp dụng kỹ thuật đông rã thủy tinh hóa (Vitrification) kỹ thuật này cho tỷ lệ sống cao hơn kỹ thuật đông phôi chậm nên số phôi sống sau rã đông là gần như 100%. Tỷ lệ sống của chúng tôi tương đương với nghiên cứu của Pinar C. Aytac & Esra B. Kilicdag (2021) và tương đương với báo cáo của Hiraoka và cộng sự (2006) tỷ lệ sống 98%. Tỷ lệ sống của chúng tôi cao hơn nghiên cứu của Han AR, Park CW, Lee HS, Yang KM, Song IO, Koong MK (2012) đã báo cáo 90,8%. Tỷ lệ sống này nó cũng phụ thuộc vào kỹ năng thao tác, chất lượng của môi trường sử dụng.
4.2.2. Bàn luận về chất lượng phôi sau rã đơng
Theo hình 3.3 có tất cả 679 phơi chuyển được nghiên cứu, trong đó phơi loại rất tốt là 148 phôi và loại tốt là 379 phôi như vậy phôi tốt chiếm 77,61%, cịn lại là 22,39% là phơi loại trung bình 111 phơi và xấu là 41 phơi tổng có 152 phơi. Như chúng ta đã biết, hiện nay có hai phương pháp đơng phơi chính được áp dụng trên lâm sàng là đơng chậm và thủy tinh hóa. Thủy tinh hóa đang dần chiếm ưu thế do hiệu quả bảo quản phôi của phương pháp này mang lại (Rezazadeh V. và cộng sự (2009), Giovanna F. và cộng sự (2014), Rienzi L. và cộng sự (2016)). Nghiên cứu của chúng tôi, phôi được đông-rã theo phương pháp thủy tinh hóa, tỷ lệ phơi sống sau rã đông là 99,85%. Theo đồng thuận Vienna của Benchmark tỷ lệ sống trên 90% là chấp nhận được và trên 99% thì được coi là tỷ lệ sống tốt. Trong nghiên cứu này tỷ lệ sống của phơi như vậy là cao, khẳng định được tính ưu việt của phương pháp đơng phơi thủy tinh hóa cũng như khả năng thực hiện kỹ thuật đông phôi tại Bệnh viện Hỗ trợ sinh sản
Theo hình 3.6 đánh giá hình thái lá ni (TE) theo tiêu chuẩn Gardner D. K1999, chúng tôi thu được kết quả như sau: Kết quả trong cho thấy chất lượng nuôi cấy phôi của chúng tôi khá tốt. Tỷ lệ lá nuôi loại A, B chiếm đại đa số là 83,65% trong khi đó tỷ lệ lá ni loại C chỉ có 16,35%.
Năm 2012, Honnma H. và cộng sự khẳng định vai trị quan trọng của lá ni chứ khơng phải nụ phôi đối với việc xem xét đánh giá lựa chọn phôi để chuyển. Tác giả nghiên cứu 1087 chu kỳ kích trứng và theo dõi kết quả chuyển 735 phôi nang đã chỉ ra tỷ lệ sảy thai tăng 52,3% trong nhóm phơi nang có TE loại B - C so với nhóm có TE loại A [55].
Năm 2013, De Paepe và cộng sự đã phần nào giải thích vai trị quan trọng của lá ni ở giai đoạn phát triển sớm của phơi nang. Trong nghiên cứu của mình, khi ni cấy độc lập phơi nang chỉ có lá nuôi (đã tách bỏ các tế bào nụ