Phần 3 Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.3.Nguyên vật liệu, đối tượng sử dụng trong nghiên cứu
3.3.1. Chủng giống vi sinh, động vật thử nghiệm
- Chủng sản xuất vắc xin vô hoạt phòng bệnh lở mồm long móng: chủng vi rút O/FMD/Avac3 là sản phẩm của đề tài nghiên cứu chọn chủng vi rút LMLM (báo cáo của công ty RTD kèm theo Công văn số 30.10/2016/BC-RTD).
- Chủng giống vi rút lựa chọn thuộc nhóm O/ME –SA/Panasia: O manisa, O/VN/ HN1/2013, O/VN/HT1/2015; nhóm O Cathay: O/VIT/9/2008; nhóm O /SEA-Mya98: O/VIT/5/2010; nhóm O/ME-SA/Ind2001: O/pig/Daklak/15. Thông tin một số chủng dùng làm phản ứng trung hoà chéo trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Nguồn gốc các vi rút được chọn để đánh giá chọn giống
STT Tên chủng giống 1 O manisa 2 O/ VN/HN1/2013 3 O/VN/HT1/20 15 4 O/FMD/Avac3 5 O/pig/Daklak/1 5 6 O/VIT/9/2008 7 O/VIT/5/2010
Vi rút được chọn có thành phẩn kháng nguyên tương đồng với chủng vi rút LMLM lưu hành ở Việt Nam
Sơn Tây- Hà Nội Kỳ Anh- Hà Tĩnh Bảo Lộc –Lâm Đồng Đắk Lắk Tp. Hồ Chí Minh Hà Tĩnh
- Động vật thí nghiệm: lợn 4 - 5 tuần tuổi chưa tiêm vắc xin LMLM và không có kháng thể kháng virus LMLM
- Tế bào BHK21 (Baby Hamster Kidney) dạng bám đáy.
3.3.2. Hóa chất
- Hóa chất và sính phẩm nuôi cấy tế bào: DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium), FBS (Fetal Bovine serum), TV 1x (Trypsin versene), PBS (Phosphate Buffered Saline), Penicillin/ Streptomycin.
- Hóa chất dùng để vô hoạt, nhũ hóa: BEI (Binary Ethylenimine), Na2S2O3 (Sodium thiosulfate), ISA 201 VG, keo phèn nhôm Al(OH)3, Saponin.
- Môi trường kiểm tra vô trùng:TSB (Trypticase Soybean), TSA (trypticase soy agar), SD (sabouraud dextrose agar), XLD (Xylose Lysine Deoxycholate), FTM (fruid thioglycolate), thạch máu.
- Hóa chất sử dụng cho phương pháp LPB - ELISA: theo bộ kít Liquid Phase Blocking ELISA (LPBE) for Detection FMDV Antibody Test Kit, Pirbright, UK bao gồm có: coating buffer, tween 20, skim milk, OPD (o- Phenylenediamine), TMB (Tetramethyl benzidine), citric acid, H2SO4, rabbit antiserum, guinea-pig antiserum, rabbit anti-Guinea Pig IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP, huyết thanh đối chứng dương, huyết thanh đối chứng âm.
3.3.3. Trang thiết bị, dụng cụ
- Phòng thí nghiệm an toàn sinh học cấp 3, nhà thử nghiệm động vật
- Phòng nuôi cấy tế bào, vi rút và các thiết bị an toàn sinh học khác: tủ ấm CO2, tủ lạnh 2 – 80 C, tủ âm 800 C, cân phân tích, máy đo pH, máy đọc ELISA, máy lắc, pipet điện, máy tạo nhũ, máy lọc tiếp tuyến.
- Dụng cụ: đầu típ các loại (10 µl, 50 µl, 100 µl, 200 µl, 1000 µl), đĩa ELISA, chai tế bào các loại: T25, T75, chai 10 tầng.