Tại thời điểm 28 ngày sau tiêm vắc xin, kết quả gây miễn dịch cho lợn bằng 1 mũi hoặc 2 mũi vắc xin đều không có khác biệt về hiệu giá kháng thể trung hòa tại (p > 0,05). Tuy nhiên, tại thời điểm D56 sau tiêm vắc xin mũi 1, lợn ở nhóm được tiêm 2 mũi vắc xin có hiệu giá kháng thể sai khác rõ ràng so với lợn ở nhóm được tiêm 1 mũi vắc xin (p < 0,05). Hiệu giá kháng thể của các nhóm lợn tiêm 2 mũi vắc xin cao hơn hẳn so với các nhóm lợn được tiêm 1 mũi vắc xin cùng nồng độ.
Hàm lượng kháng thể trung hòa tăng cao rõ rệt sau mũi tiêm nhắc lại phù hợp với quy luật hình thành kháng thể đặc hiệu, đưa kháng nguyên vào đúng liều lượng và được tiêm nhắc lại, kháng thể xuất hiện sẽ nhanh và cao hơn do được tiếp xúc với các tế bào “nhớ”. Đáp ứng miễn dịch khi gia súc tiêm phòng lần đầu có thể chỉ sau 6 tuần khả năng bảo hộ không còn đảm bảo, vì vậy để duy trì đáp ứng miễn dịch và nâng cao khả năng miễn dịch của động vật cứ sau một khoảng thời gian nhất định cần tiêm nhắc lại. Có tác giả còn khuyến cáo, để đạt được hiệu quả tốt khi tiêm phòng vắc xin LMLM cho lợn, việc tiêm phòng lần đầu nên được thực hiện khi lợn từ 10- 12 tuần tuổi, tiêm nhắc lại sau 4 tuần (Chung & cs., 2002).
Trong nghiên cứu sản xuất vắc xin, một trong các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch của cơ thể là liều lượng vi rút kháng nguyên trong một liều vắc xin. Theo một số kết quả nghiên cứu cho thấy, hàm lượng kháng thể đạt được sẽ tỷ lệ thuận với liều lượng kháng nguyên đưa vào ở một phạm vi nhất định. Nếu liều lượng kháng nguyên quá thấp sẽ không đủ kích thích cơ thể gây đáp ứng miễn dịch. Nếu liều lượng kháng nguyên quá cao sẽ dẫn đến gây độc cho cơ thể, hoặc tê liệt miễn dịch, có thể dung nạp đặc hiệu với lần gây miễn dịch tiếp theo, cuối cùng là ức chế khả năng sản sinh ra kháng thể. Ngày nay trên thế giới có nhiều phương pháp để xác định liều của vắc xin LMLM như: xác định hàm lượng 146S hoặc phương pháp lý tưởng là đánh giá đáp ứng miễn dịch của động vật (tính liều PD50) bằng cách công cường độc (Oie, 2018). Tuy nhiên phương pháp xác định hàm lượng 146S yêu cầu thiết bị đắt tiền. Hạn chế của phương pháp xác định PD50 là đòi hỏi phải có phòng an toàn sinh học cấp 3 cho cả phòng thí nghiệm và khu nuôi động vật thí nghiệm. Vì vậy, trong điều kiện cơ sở vật chất hiện tại và khuôn khổ của đề tài, dựa trên hàm lượng vi rút LMLM chuẩn độ trước khi vô hoạt chúng tôi xác định liều gây miễn dịch cho bản động vật. Tham chiếu TCVN 8685-10:2014 và tiêu chuẩn của OIE, hiệu giá kháng thể của lợn sau khi tiêm 2 mũi vắc xin của cả 3 nhóm liều kháng nguyên (6 - 7 - 7,5 log10 TCID50/ml) đều đạt chỉ tiêu hiệu lực của vắc xin LMLM. Mặt khác, yếu tố hàm lượng vi rút trước khi vô hoạt còn là yếu tố quyết định trong quy trình sản xuất và giá thành sản phẩm. Vì vậy, từ các kết quả thu được nêu trên, nồng độ vi rút sản xuất vắc xin LMLM vô hoạt nhũ dầu kép được chọn là 7 log10 TCID50/ml.
Nhiều nghiên cứu trên thế giới đã chỉ ra ưu điểm nổi trội của việc sử dụng liều cao kháng nguyên vi rút LMLM (≥ 6PD50) trong việc (i) tạo ra đáp ứng
miễn dịch sớm (sau khi sử dụng vắc xin vô hoạt 4- 7 ngày) (Salt & cs., 1998; Nagendrakumar & cs., 2015), (ii) mở rộng khả năng bảo hộ chéo chống lại công cường độc (Brehm & cs., 2008) và (iii) vẫn đạt hiệu giá bảo hộ chỉ với 1 lần tiêm (Liao & cs., 2003). Do vậy, song song với việc sản xuất vắc xin LMLM từ chủng O3, cần tiếp tục nghiên cứu để nâng cao chất lượng vắc xin LMLM týp O ở tiêu chí nâng cao liều kháng nguyên.
4.3. ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT BỔ TRỢ TỚI ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH
Chất bổ trợ là những hợp chất thêm vào trong vắc xin nhằm làm tăng khả năng kích thích miễn dịch và hiệu lực của vắc xin. Chất bổ trợ có thể quyết định mức độ và độ dài quá trình đáp ứng miễn dịch của vắc xin. Đặc biệt đối với vắc xin vô hoạt, chất bổ trợ ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu quả của vắc xin. Sau khi đã xác định được nồng độ vi rút (7 log10 TCID50/ml) và số lần tiêm vắc xin cho lợn (tiêm 2 mũi vắc xin, mũi 2 cách mũi 1 là 28 ngày), chúng tôi tiếp tục đánh giá ảnh hưởng của bổ trợ keo phèn đến tính sinh miễn dịch của vắc xin. Kết quả xác định hiệu giá kháng thể của vắc xin bổ trợ keo phèn được trình bày trong bảng 4.3.
Bảng 4.3. Đáp ứng miễn dịch của lợn khi tiêm vắc xin LMLM vô hoạt keo phèn Nhóm Thí nghiệm (K1) Đối chứng (K2)
Kết quả hiệu giá kháng thể trung hoà của lợn trong bảng 4.3 cho thấy, lợn có đáp ứng miễn dịch đối với vắc xin LMLM vô hoạt keo phèn. Kháng thể bắt đầu tăng tại thời điểm 14 ngày sau tiêm, đến 28 ngày sau tiêm vắc xin hiệu giá là 1,28 log10. Sau khi tiêm mũi 2 tại 28 ngày, kháng thể bắt đầu tăng dần, hiệu giá đạt cao nhất tại thời điểm 42 ngày sau tiêm là 1,75 log10. Nhưng sau đó, kháng thể có xu hướng giảm dần, đến thời điểm 56 ngày sau tiêm, kháng thể trung hoà chỉ được 1,37 log10. Như vậy, kết quả cho thấy sau khi tiêm vắc xin LMLM vô hoạt keo phèn ở lợn, kháng thể tăng nhưng không ổn định và không kéo dài. Biến động hiệu giá kháng thể trung hòa được thể hiện ở hình 4.7.