Nguồn: Trần Thanh Phong(1996) Qua đường miệng
Virus vào máu
Tuỷ xương Ruột Hạch bạch huyết và lách
Hoại tử những tế bào sinh lympho Hoại tử biểu mô ruột
Giảm thiểu tế bào lympho Viêm ruột/tiêu chảy
Khỏi bệnh Chết
2.2.5. Triệu chứng
Thời gian nung bệnh khoảng 5-7 ngày. Bệnh thường biểu hiện ở 3 dạng chủ yếu như sau:
Dạng điển hình (viêm ruột xuất huyết)
Đây là dạng phổ biến nhất, thường mắc ở chó 6 ÷ 12 tuần tuổi.Virus gây thiệt hại nghiêm trọng đến đường ruột, virus phân chia trong các tế bào biểu mô ruột, gây hoại tử, viêm loét bong tróc các tếbào niêm mạc, vì thế gây hiện tượng tiêu chảy - xuất huyết. Niêm mạc thường theo phân ra ngoài, hợp lại với các chất khác tạo nên một mùi hôi tanh khó chịu.Từ đó tạo điều kiện thuận lợi cho các nhiễm trùng thứ cấp khi các vi khuẩn đường ruột như Salmonella, E.coli, Coronavirus, C. perfringens, Campylobacter và các ký sinh trùng khác có thể xâm nhập vào mạch máu nhiều hơn qua những vùng niêm mạc bị bong tróc, từ đó tạo nên quá trình nhiễm trùng thứ cấp.
Theo Tô Du và cs. (2006), dạng này gặp phổ biến ở chó 6 tuần đến 1 năm tuổi. Thời gian ủ bệnh ngắn từ 1 – 2 ngày. Lúc đầu, chó sốt nhẹ 39 – 39,5oC, cơn sốt kéo dài 1 – 2 ngày, chó mệt, ăn kém hoặc bỏ ăn, uống nước nhiều, nôn mửa liên tục. Sau đó, chó mệt lả vì ỉa chảy nặng và nhiều. Phân loãng dần, có nhiều máu đỏ nâu, màu hồng, có lẫn niêm mạc ruột lầy nhầy và có mùi tanh khắm đặc trưng. Khi ỉa chảy cũng là lúc chó bị hạ nhiệt dưới mức bình thường (370C). Chó gầy sút rất nhanh vì mất nước, mất máu, sốc do nội độc tố hoặc nhiễm trùng thứ phát.
Về chỉ tiêu huyết học, khi chó mắc bệnh thường bị mất nước trầm trọng, tăng thân nhiệt (50%), giảm thiểu lượng bạch cầu (60 – 70% tổng số các trường hợp), chủ yếu giảm bạch cầu trung tính và tế bào lympho đôi khi còn ít hơn 400 – 500 bạch cầu/mm3 trong những trường hợp nghiêm trọng (Tô Dung và Xuân Dao, 2006).
Thể quá cấp tính: Con vật chết sau 3 ngày do trụy tim mạch.
Thể cấp tính: Chết sau 5 – 6 ngày do hạ huyết áp và do tác động bội nhiễm của vi khuẩn.
Tỷ lệ tử vong cao trên chó từ 6 – 10 tuần tuổi, chó đã qua 5 ngày mắc bệnh thì thường có kết quả điều trị khả quan.
Dạng này hay gặp ở chó con 4 – 8 tuần tuổi. Thể này ít phổ biến hơn thể đường ruột.
Bệnh thường rất nặng, chó bị suy tim cấp do virus tấn công gây hoại tử cơ tim. Con vật thường chưa biểu hiện triệu chứng gì đã lăn ra chết đột ngột do suy hô hấp trong thời gian ngắn vì phổi bị phù. Do những biến đổi về bệnh tích ở van tim và cơ tim, từ đó xuất hiện những tạp âm ở tim hay những biến đổi về điện tim đồ (Nguyễn Như Pho, 2003).
Những trường hợp khác có thể thấy chó biểu hiện thiếu máu nặng, niêm mạc nhợt nhạt, nhão. Lớp mỡ vàng và cơ tim có xuất huyết, chó chết nhanh từ 1 – 2 ngày. Những ổ chó bệnh dạng này có thể tỷ lệ chết có thể tới 50%(Phạm Sỹ Lăng và cs., 2006).
Chó con tồn tại được sẽ có sẹo trong cơ tim. Thể bệnh này có thể hoặc không đi kèm với các dấu hiệu và triệu chứng của thể đường ruột. Tuy nhiên thể này bây giờ đã hiếm trên thế giới.
Dạng kết hợp tim – ruột
Gặp ở chó 6 – 16 tuần tuổi. Con vật chết nhanh sau 24 giờ tính từ khi có triệu chứng đầu tiên, do ỉa chảy nặng, thiếu máu, sốc tim và phù phổi.
2.2.6. Bệnh tích
* Bệnh tích đại thể
Niêm mạc ruột sung huyết, xuất huyết, lớp nhung mao ruột bị bào mòn, nhất là ở không tràng.
Lách có màu sắc và hình dạng không đồng nhất. Niêm mạc dạ dày xuất huyết một phần hay toàn bộ. Gan có thể sưng, túi mật căng. Hạch bạch huyết: phù thũng, xuất huyết.
Khi mắc bệnh ở thể tim thì có thể gặp bệnh tích phù thũng phổi, viêm cơ tim (Nguyễn Như Pho, 2003).
* Bệnh tích vi thể
Ruột: Hoại tử biểu mô tuyến Lieberkuhn, toàn bộ nhung mao ruột bị bào mòn. Cơ quan lympho: hoại tử và tiêu huỷ những tế bào lympho trong mảng payer, trong hạch bạch huyết màng treo ruột.
2.2.7. Chẩn đoán
Các dấu hiệu lâm sàng quan sát được khi mắc bệnh do CPV-2 như nôn mửa, tiêu chảy, ủ rũ, mệt mỏi, mất nước, sốt và sự suy giảm bạch cầu trong cơ thể chó con chưa tiêm vacxin thường không đặc hiệu tuy nhiên vẫn là cơ sở giả định cho chẩn đoán ban đầu. Các xét nghiệm chẩn đoán chính xác bao gồm tìm thấy virus trong phân của chó bị nhiễm, huyết thanh học và mô bệnh học. Chẩn đoán CPV-2 qua huyết thanh học là phát hiện kháng thể chống lại CPV-2,kháng thể thuộc lớp IgM. Xét nghiệm miễn dịch để kiểm tra có mặt CPV-2 trong phân chó con bị nhiễm. Các phương pháp khác để phát hiện kháng nguyên CPV-2 trong phân như miễn dịch huỳnh quang, PCR… Phương pháp PCR cho kết quả nhanh chóng, chính xác hơn phương pháp truyền thống như khám lâm sàng, xác định tổn thương đại thể… (Amelia Goddardet al., 2010).
Chẩn đoán lâm sàng
Chẩn đoán dựa vào các triệu chứng lâm sàng, các tổn thương đại thể và yếu tố dịch tễ như:
- Tỷ lệ nhiễm cao;
- Thường gây ra trên chó từ 6 - 12 tuần tuổi; - Tỷ lệ tử vong cao (trên 50%);
- Chó có biểu hiện: bỏ ăn, ủ rũ, nôn, tiêu chảy có lẫn máu tươi, sốt cao…; - Tổn thương ruột nặng: biểu mô ruột bị huỷ hoại, tế bào lông nhung bị bào mòn…;
- Cần chẩn đoán phân biệt với các bệnh gây viêm ruột khác trên chó: + Viêm ruột do Coronavirus: bệnh lây lan rất rộng nhưng không nguy hiểm, tỷ lệ tử vong thấp.
+ Viêm ruột do Rotavirus: bệnh gây tiêu chảy nhưng cách sinh bệnh chưa được biết một cách rõ ràng.
+ Viêm ruột do mắc bệnh Care: có triệu chứng hô hấp và thần kinh đặc trưng, thường sốt cao trong nhiều ngày (400C – 410C), viêm phổi, viêm ruột (hiếm khi có máu tươi), có thể gặp những nốt sài, mụn mủ ở vùng da ít lông.
- Viêm dạ dày ruột trong bệnh xoắn khuẩn do Leptospira gây ra: tiến trình bệnh xảy ra nhanh với đặc điểm gây suy thận và nhiễm trùng huyết.
- Ngoài ra còn gặp các trường hợp viêm ruột ỉa chảy do ký sinh trùng (cầu trùng trên chó, giun đũa, giun móc...) hoặc gây tiêu chảy do rối loạn tiêu hoá, các tác động gây co thắt hay tắc nghẽn ruột.
Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm
* Phân lập virus
Có thể thực hiện nuôi cấy trên môi trường tế bào nhưng thời gian lâu dài và tốn kém. Cần lưu ý rằng sự tiêm chủng virus vacxin nhược độc dẫn đến bàithải virus trong 4 – 10 ngày, tuy yếu nhưng sự bài thải này có thể dẫn đến kết quả dương tính giả (Nguyễn Như Pho, 2003); (Phạm Sỹ Lăng và cs., 1998).
Một số dòng tế bào gốc nuôi cấy và các dòng tế bào MDCK (Madin Darby Canine Kidney) hay CRFK (Crandell Rees Feline Kidney) thích hợp với
Parvovirus type 2. Parvovirustype 2 có thể phân lập được từ các trường hợp viêm cơ tim và viêm ruột do Parvovirus gây ra.
* Soi trên kính hiển vi điện tử
Trong trường hợp bệnh cấp tính, virion Parvovirus có thể tìm thấy trong phân bằng cách sử dụng soi trực tiếp bằng kính hiển vi điện tử.
* Chẩn đoán huyết thanh học
Dùng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu - Haemagglutination Inhibition test HI (dễ thực hiện, cho kết quả tương đối chính xác). Kháng thể xuất hiện trong máu khi bắt đầu tiêu chảy nhưng với hiệu giá thấp. Trên thực tế người ta thường dùng test ELISA để chẩn đoán (Nguyễn Như Pho, 2003). Phương pháp ELISA có thể thực hiện ở ngày đầu tiên của bệnh cho đến 3 hoặc 4 ngày sau đó. Các phương pháp ELISA có thể là âm tính giả nếu chạy quá sớm trong quá trình bệnh (Vương Đức Chất và Lê Thị Tài, 2004).
- Phản ứng ELISA (Enzym Linked Immuno Sorbent Assay)
Nguyên lý: Phản ứng ELISA dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên, rồi cho cơ chất vào. Nếu kháng thể tương ứng với kháng nguyên thì kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym không bị rửa trôi, enzym sẽ phân giải cơ chất tạo nên màu, khi so sánh trong quang phổ kế sẽ định lượng được mức độ phản ứng (Nguyễn Như Thanh, 1974).
Lấy mẫu phân để làm phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên, các phương pháp ELISA có thể thực hiện ở ngày đầu tiên của bệnh cho đến 3 hoặc 4
ngày sau đó. Các phương pháp ELISA có thể là âm tính giả nếu chạy quá sớm trong quá trình bệnh.
- Phản ứng HA (Haemagglutination)
Thí nghiệm Hemaglutination được thực hiện như mô tả của Carmichael et al.(1980). Các mẫu được pha loãng theo thứ tự gấp đôi trong PBS (0,2M) trong đĩađáy-V. Đầu tiên, 50μl PBS đã được thêm vào mỗi giếng của đĩa. Trong cột đầu tiên, đã thêm 50μl mẫu (huyền phù phân hoặc dịch nuôi cấy tế bào). Mẫu được trộn năm lần, hút 50μl đã được chuyển sang giếng tiếp theo. Mỗi mẫu được pha loãng từ 1:2 đến 1:4,096. Sau đó, 50μl PBS đã được thêm vào mỗi giếng. Thử nghiệm HA được thực hiện bằng hồng cầu lợn (0,5%). Vỗ nhẹ ở góc đĩa khoảng bốn hoặc năm lần để trộn hồng cầu. Các đĩa được phủ nắp và ủ ở 4-7°C trong 2-4 giờ. Hiệu giá được tính như là giá trị nghịch đảo của giếng cuối với sự đông kết. Sau khi ủ qua đêm, một số mẫu dương tính có thể rửa sạch.
- Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI (Haemagglutination Inhibition)
Kháng thể CPV-2 cũng được xác định bằng cách sử dụng xét nghiệm HI, như mô tả bởi Carmichael et al.(1980). Kháng thể có thể phát hiện bởi HI sau khi gây nhiễm vào ngày thứ 3 hoặc 4 và với hiệu giá cao (>640) vào ngày thứ 7.
Huyết thanh có độ nhiễm HI từ 1:80 trở lên được xem là dương tính với CPV, những huyết thanh có độ âm HI dưới 1:40 được coi là âm tính với CPV-2.
* Chẩn đoán bằng test CPV
Lấy phân của những chó nghi mắc bệnh Parvovirus làm phản ứng nhanh bằng test thử CPV.
Nguyên lý: Thiết bị này dựa vào nguyên lý ELISA để phát hiện kháng nguyên của Parvovirus trên chó từ các mẫu xét nghiệm phân. Hai kháng thể đơn dòng trong thiết bị kết hợp với các khu quyết định kháng nguyên khác nhau của kháng nguyên cần chẩn đoán. Sau khi cho bệnh phẩm thấm vào vị trí đệm celluloz của thiết bị, các kháng nguyên của Parvovirus sẽ di chuyển và kết hợp với hợp chất thể keo màu vàng chứa kháng thể đơn dòng kháng virus, để tạo thành phức hợp “kháng nguyên - kháng thể”. Sau đó, phức hợp này kết hợp với kháng thể đơn dòng kháng Parvovirus khác trong màng nitơ - celluloz của thiết bị, để tạo thành hợp chất kép hoàn chỉnh “kháng thể - kháng nguyên - kháng thể” (theo ELISA sandwich). Kết quả xét nghiệm có thể được biểu lộ qua sự
xuất hiện các vạch chữ C và vạch mẫu T do thiết bị sử dụng “phương pháp sắc ký miễn dịch”.